中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)大腸桿菌是人和動(dòng)物腸道中最著名的一種細(xì)菌，主要寄存者在大腸內(nèi)，約占腸道菌中的百分之一，是一種兩端鈍圓、能運(yùn)動(dòng)、無(wú)芽孢的革蘭氏陰性短桿菌。所以大腸桿菌經(jīng)常作為細(xì)菌的模式生物廣泛用于科學(xué)研究。下面就是小編對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，僅供參考！
菌種名稱： 大腸桿菌
培養(yǎng)基 ： LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。
儀器或其他用具 ： 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無(wú)菌試管，無(wú)菌吸管等。
操作步驟
1．標(biāo)記
取11支無(wú)菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
2．接種
分別用5ml無(wú)菌吸管吸取2.5ml 大腸桿菌過夜培養(yǎng)液(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。
3．培養(yǎng)
將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。
4．比濁測(cè)定
用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，選用600nm波長(zhǎng)進(jìn)行光電比濁測(cè)定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測(cè)定，對(duì)細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其光密度值在0.1~0.65之內(nèi)(測(cè)定OD值前，將待測(cè)定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。
本操作步驟也可用簡(jiǎn)便的方法代替：
1．用1ml無(wú)菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計(jì)的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個(gè)大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。
2．分別在培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測(cè)定OD值。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。
大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時(shí)期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線，了解其生長(zhǎng)繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長(zhǎng)具有重要意義。