蔗糖胰蛋白胨肉湯的試驗(yàn)方法與現(xiàn)象及結(jié)果解讀與注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-06-25 09:27:49
蔗糖胰蛋白胨肉湯（Sucrose Tryptone Broth）是一種常用的液體培養(yǎng)基，主要用于檢測(cè)細(xì)菌是否能夠發(fā)酵蔗糖。其原理是利用細(xì)菌發(fā)酵蔗糖產(chǎn)生酸類物質(zhì)，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑變色，從而判斷發(fā)酵結(jié)果。同時(shí)，培養(yǎng)基中通常含有倒置的小發(fā)酵管，用于收集發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的氣體，以判斷是否產(chǎn)氣。
一、試驗(yàn)方法
1、培養(yǎng)基制備：
成分：胰蛋白胨（提供氮源、碳源、維生素等）、蔗糖（唯一可發(fā)酵的碳水化合物）、酚紅（pH指示劑）、氯化鈉（維持滲透壓）、蒸餾水。
配制：按配方準(zhǔn)確稱量各組分，溶解于蒸餾水中。
pH調(diào)整：用NaOH或HCl將培養(yǎng)基pH調(diào)整至7.4±0.2（此時(shí)酚紅呈紅色或橙紅色）。
分裝與滅菌：將培養(yǎng)基分裝至試管中，每管約5-10ml。在每支試管中放入一個(gè)倒置的小發(fā)酵管，確保其完全充滿培養(yǎng)基且無(wú)氣泡。在121°C (15 psi) 下高壓蒸汽滅菌15分鐘。滅菌后冷卻備用。
2、接種：
在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)挑取待測(cè)細(xì)菌的純培養(yǎng)物（通常是一個(gè)分離良好的單菌落）。
將菌種接種到裝有蔗糖胰蛋白胨肉湯的試管中。輕輕旋轉(zhuǎn)試管或上下移動(dòng)接種環(huán)使菌體混勻（避免劇烈震蕩導(dǎo)致倒管中有大氣泡殘留）。
同時(shí)接種一支未加糖的胰蛋白胨肉湯（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）作為陰性對(duì)照（顏色應(yīng)保持紅色不變），以及一支已知蔗糖陽(yáng)性菌（如
大腸桿菌的部分菌株）和一支已知蔗糖陰性菌（如
志賀氏菌或
沙門氏菌）作為陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。
3、培養(yǎng)：
將接種好的試管和對(duì)照管放入恒溫培養(yǎng)箱中。
通常在35-37°C下培養(yǎng)。
培養(yǎng)時(shí)間一般為18-24小時(shí)。如果24小時(shí)后無(wú)變化，可繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)再觀察，特別是對(duì)生長(zhǎng)較慢的細(xì)菌。
4、觀察：
顏色變化：觀察培養(yǎng)基顏色的變化，特別注意與未接種管和陰性對(duì)照管比較。
氣體產(chǎn)生：觀察倒置的小發(fā)酵管內(nèi)是否有氣泡聚集。氣泡體積占倒管體積的10%或以上通常被認(rèn)為是陽(yáng)性（產(chǎn)氣）。
二、現(xiàn)象與結(jié)果解讀
1、陽(yáng)性反應(yīng)（蔗糖發(fā)酵）：
產(chǎn)酸：細(xì)菌發(fā)酵蔗糖產(chǎn)生酸性代謝產(chǎn)物（如乳酸、乙酸等）。
現(xiàn)象：培養(yǎng)基中的酚紅指示劑由紅色/橙紅色變?yōu)辄S色（pH下降至6.8以下）。這是蔗糖發(fā)酵的主要標(biāo)志。
產(chǎn)氣（可選）：如果發(fā)酵過(guò)程同時(shí)產(chǎn)生氣體（如CO?和H?）。
現(xiàn)象：倒置的小發(fā)酵管內(nèi)出現(xiàn)氣泡（大小至少占倒管體積的10%）。
結(jié)果描述：蔗糖發(fā)酵陽(yáng)性（A）或蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣陽(yáng)性（A/G）。
2、陰性反應(yīng)（蔗糖不發(fā)酵）：
不產(chǎn)酸：細(xì)菌不能利用蔗糖作為碳源進(jìn)行發(fā)酵，或者代謝途徑不產(chǎn)酸。
現(xiàn)象：培養(yǎng)基顏色保持不變（紅色或橙紅色），或有時(shí)因細(xì)菌分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)而變?yōu)楦畹募t色（紫紅色）（堿性反應(yīng)）。倒管中沒(méi)有氣泡或氣泡體積小于10%。
結(jié)果描述：蔗糖發(fā)酵陰性（-）。
3、特殊情況：
產(chǎn)堿反應(yīng)：如果細(xì)菌不能發(fā)酵蔗糖但能強(qiáng)烈分解培養(yǎng)基中的蛋白胨產(chǎn)生堿性產(chǎn)物，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基由紅色變?yōu)樯罴t色或紫紅色。這也屬于蔗糖發(fā)酵陰性。
遲緩發(fā)酵：少數(shù)細(xì)菌可能在24小時(shí)內(nèi)不發(fā)酵，但延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間（如48小時(shí)）后出現(xiàn)黃色變化（陽(yáng)性）。
微弱產(chǎn)氣：氣泡非常小（<10%倒管體積）通常視為不產(chǎn)氣（陰性）。
三、重要注意事項(xiàng)
無(wú)菌操作：整個(gè)接種過(guò)程必須嚴(yán)格無(wú)菌，避免污染導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性。
純培養(yǎng)物：必須使用待測(cè)細(xì)菌的純培養(yǎng)物進(jìn)行接種，混合培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致結(jié)果無(wú)法解釋。
對(duì)照設(shè)置：設(shè)置未接種對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（已知蔗糖陽(yáng)性菌）和陰性對(duì)照（已知蔗糖陰性菌）對(duì)于正確解讀結(jié)果至關(guān)重要。對(duì)照管的結(jié)果應(yīng)符合預(yù)期。
正確判讀顏色：觀察顏色變化時(shí)，要在良好的白光下進(jìn)行，并與對(duì)照管比較。注意區(qū)分黃色（酸性）、橙紅色（中性/初始狀態(tài)）和紅色/紫紅色（堿性）。
倒管氣泡：接種后和培養(yǎng)前，確保倒管內(nèi)沒(méi)有殘留的大氣泡（小氣泡可以忽略）。培養(yǎng)后觀察到的氣泡應(yīng)是發(fā)酵新產(chǎn)生的。
培養(yǎng)時(shí)間：嚴(yán)格遵守推薦的培養(yǎng)時(shí)間和溫度。過(guò)早或過(guò)晚觀察都可能導(dǎo)致誤判。
四、應(yīng)用
腸桿菌科細(xì)菌的初步鑒定和分群（例如，大腸桿菌通常蔗糖陽(yáng)性，而沙門氏菌和志賀氏菌通常蔗糖陰性）。
其他需氧和兼性厭氧細(xì)菌的糖發(fā)酵能力鑒定。
篩選能夠利用蔗糖作為碳源的細(xì)菌。
通過(guò)觀察
蔗糖胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)后的顏色變化和氣體產(chǎn)生情況，可以快速判斷細(xì)菌是否具有發(fā)酵蔗糖并產(chǎn)酸的能力，這是細(xì)菌生化鑒定中一項(xiàng)常用且重要的試驗(yàn)。
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