藥檢中金黃色葡萄球菌檢測(cè)過程中如何確保結(jié)果的準(zhǔn)確性？
小楊 / 2025-12-15 09:40:40
金黃色葡萄球菌藥檢過程中，結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到藥品的安全性，需從試驗(yàn)設(shè)計(jì)、操作規(guī)范、質(zhì)量控制等多環(huán)節(jié)嚴(yán)格把控。以下是確保結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵措施：
一、試驗(yàn)前：做好基礎(chǔ)準(zhǔn)備與質(zhì)量控制
1、標(biāo)準(zhǔn)菌株與對(duì)照系統(tǒng)的有效性
每次試驗(yàn)同步設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照：
陽(yáng)性對(duì)照：驗(yàn)證增菌、分離、生化試驗(yàn)系統(tǒng)的有效性（如陽(yáng)性菌應(yīng)正常生長(zhǎng)并符合典型特征）；
陰性對(duì)照：排除干擾菌（如凝固酶陰性葡萄球菌）的假陽(yáng)性；
空白對(duì)照：檢測(cè)培養(yǎng)基、稀釋劑、試劑是否污染（應(yīng)無菌生長(zhǎng)）。
2、培養(yǎng)基與試劑的質(zhì)量控制
培養(yǎng)基（如 7.5% 氯化鈉肉湯、甘露醇氯化鈉瓊脂、兔血漿）需符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，批次間進(jìn)行無菌性、促生長(zhǎng)能力及選擇性驗(yàn)證（如 MSA 對(duì)
金黃色葡萄球菌的選擇性和甘露醇發(fā)酵指示效果）。
關(guān)鍵試劑（如 3% 過氧化氫、凝固酶試驗(yàn)用兔血漿）需在有效期內(nèi)使用，兔血漿需驗(yàn)證凝固能力（避免因失效導(dǎo)致假陰性）。
3、樣品處理的規(guī)范性
按藥典要求進(jìn)行樣品稀釋（如固體樣品研磨、液體樣品梯度稀釋），確保樣品均勻性，避免因取樣不均導(dǎo)致漏檢。
若樣品含抑菌成分，需采用中和劑、稀釋法或薄膜過濾法去除抑菌作用，防止抑制目標(biāo)菌生長(zhǎng)（可通過陽(yáng)性菌回收率試驗(yàn)驗(yàn)證中和效果）。
二、試驗(yàn)中：嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)范，減少誤差
1、增菌培養(yǎng)的嚴(yán)謹(jǐn)性
增菌條件嚴(yán)格控制：7.5% 氯化鈉肉湯需在 30~35℃培養(yǎng) 18~24 小時(shí)，必要時(shí)延長(zhǎng)至 48 小時(shí)（避免因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致弱生長(zhǎng)菌株漏檢）。
觀察增菌液時(shí)，若出現(xiàn)輕微混濁，需及時(shí)轉(zhuǎn)接分離，不可僅憑“澄清”直接判定陰性（可能存在低濃度菌生長(zhǎng)）。
2、分離培養(yǎng)的選擇性與準(zhǔn)確性
從增菌液中取適量（如 1~2 環(huán)）劃線接種至兩種選擇性培養(yǎng)基（如 MSA 和血瓊脂），提高檢出率（避免單一培養(yǎng)基的局限性）。
分離培養(yǎng)后，仔細(xì)觀察菌落形態(tài)：MSA 上需關(guān)注“黃色菌落（甘露醇發(fā)酵陽(yáng)性）”，血瓊脂上需識(shí)別“金黃色菌落 +β- 溶血環(huán)”，對(duì)疑似菌落（如形態(tài)接近但不完全典型）需全部挑取進(jìn)行后續(xù)鑒定，避免漏檢。
3、生化鑒定的關(guān)鍵指標(biāo)把控
革蘭染色：確保涂片厚度適宜，染色步驟規(guī)范（結(jié)晶紫初染、碘液媒染、酒精脫色、復(fù)染），鏡檢時(shí)需找到“葡萄串狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌”（避免因脫色過度導(dǎo)致假陰性）。
凝固酶試驗(yàn)：這是金標(biāo)準(zhǔn)，需嚴(yán)格控制溫度（37℃）和時(shí)間（3~4 小時(shí)觀察，24 小時(shí)內(nèi)確認(rèn)），避免因時(shí)間不足（假陰性）或污染（假陽(yáng)性）導(dǎo)致誤判。
補(bǔ)充試驗(yàn)：對(duì)非典型菌株（如凝固酶弱陽(yáng)性、菌落形態(tài)不典型），需做耐熱核酸酶試驗(yàn)（金黃色葡萄球菌陽(yáng)性）或 PCR 檢測(cè)（nuc 基因），進(jìn)一步確認(rèn)。
4、無菌操作與防污染
整個(gè)過程在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，接種環(huán)、移液槍頭等需徹底滅菌，避免操作環(huán)境（如臺(tái)面、空氣）中的
金黃色葡萄球菌污染樣品（尤其注意操作人員手部或環(huán)境中的定植菌）。
不同樣品、對(duì)照品的操作工具嚴(yán)格區(qū)分，防止交叉污染。
三、試驗(yàn)后：結(jié)果復(fù)核與記錄追溯
1、結(jié)果的綜合判定與復(fù)核
結(jié)合增菌、分離、形態(tài)、生化結(jié)果及對(duì)照試驗(yàn)，缺一不可：
若陽(yáng)性對(duì)照未生長(zhǎng)或陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性，試驗(yàn)無效，需重新檢測(cè)；
若供試品菌落形態(tài)典型但生化試驗(yàn)陰性（如凝固酶陰性），需重復(fù)試驗(yàn)，排除操作失誤。
2、完整記錄與可追溯性
記錄所有關(guān)鍵信息：樣品信息、培養(yǎng)基批次、菌株編號(hào)、培養(yǎng)時(shí)間/溫度、菌落特征、生化試驗(yàn)結(jié)果、對(duì)照情況等。
若結(jié)果異常（如疑似陽(yáng)性），需由第二人復(fù)核操作過程和結(jié)果，必要時(shí)重新取樣檢測(cè)。
四、人員與環(huán)境的保障
1、人員資質(zhì)與培訓(xùn)
檢測(cè)人員需熟悉藥典方法，掌握
金黃色葡萄球菌的形態(tài)特征和生化特性，定期進(jìn)行操作培訓(xùn)和能力驗(yàn)證（如盲樣測(cè)試）。
2、環(huán)境控制
實(shí)驗(yàn)室需分區(qū)（清潔區(qū)、操作區(qū)、培養(yǎng)區(qū)），避免交叉污染；定期對(duì)環(huán)境（如生物安全柜、培養(yǎng)箱）進(jìn)行消毒和微生物監(jiān)測(cè)，防止環(huán)境菌干擾。
通過以上措施，可最大限度減少假陽(yáng)性（如污染）和假陰性（如抑菌作用、操作失誤），確保
金黃色葡萄球菌檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為藥品質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。
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