2015版中國藥典無菌檢查法（1）
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-01-13 15:10:35
-2015版中國藥典無菌檢查法
無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。
無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度B 級背景下的局部A 級潔凈度的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗還需對試驗環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。
無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。
培養(yǎng)基
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氣菌培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基適用于真菌和需氣菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。
1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g
葡萄糖 5.0g 氯化鈉 2.5g
L-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
硫乙醇酸鈉 0.5g 瓊脂 0.75g
(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 純化水 1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培2養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超過20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30～35℃培養(yǎng)。
2. 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基
胰酪胨 17.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖（一水合/無水） 2.5g （2.3g） 純化水 1000mL
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置20～25℃培養(yǎng)。
3. 選擇性培養(yǎng)基
按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗。
4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查）
胨 10.0g 氯化鈉 5.0g
葡萄糖 5.0g 水 1000 ml
牛肉浸出粉 3.0g
除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.2±0.2，分裝，滅菌。
5. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 15.0g 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 瓊脂 15.0g
純化水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合。微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。
6.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 20.0g 純化水 1000mL
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25℃的pH 值為5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
7. 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 40.0g 純化水 1000mL
瓊脂 15.0g
除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后在25℃的pH值為5.6±0.2，加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。
培養(yǎng)基的適用性檢查
無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進(jìn)行。
無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5 支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天，應(yīng)無菌生長。
靈敏度檢查
菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5 代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0 代），并采用適宜的菌種保存技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕
枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
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