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微生物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)中無菌取樣的核心原則及操作規(guī)范與要點(diǎn)!
小楊 / 2025-07-07 10:05:43

 

百歐博偉生物:“無菌取樣”是指在獲取樣品(如微生物檢測(cè)樣品、無菌產(chǎn)品、細(xì)胞培養(yǎng)物等)的過程中,嚴(yán)格防止任何外來微生物污染樣品的操作方法和過程。其核心目標(biāo)是確保所取樣品能夠真實(shí)反映其原始狀態(tài)下的微生物狀況(無論是有菌還是無菌),避免因取樣操作本身引入污染而導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果或產(chǎn)品污染。
 
一、無菌取樣的核心原則:
 
1、防止污染:這是最根本的原則。所有操作都要圍繞避免環(huán)境中、操作者身上或取樣工具上的微生物進(jìn)入樣品。
 
2、使用無菌器具:所有直接接觸樣品的工具(如注射器、針頭、鑷子、剪刀、取樣勺、拭子、培養(yǎng)皿、試管、容器等)必須經(jīng)過有效的滅菌處理(如高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌或無菌一次性使用),并在使用前保持其無菌狀態(tài)。
 
3、無菌環(huán)境/區(qū)域:取樣應(yīng)在盡可能潔凈的環(huán)境中進(jìn)行。理想情況下應(yīng)在專門的潔凈室、生物安全柜或超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。如果在現(xiàn)場(chǎng)或非受控環(huán)境取樣,需采取額外防護(hù)措施(如使用火焰屏障、無菌罩等)。
 
4、操作者無菌操作:
 
操作人員需穿戴干凈的工作服(最好是無菌服)、口罩、帽子。
 
操作前必須嚴(yán)格、規(guī)范地洗手和消毒(通常使用70-75%酒精或?qū)S孟緞?/div>
 
操作時(shí)需佩戴無菌手套,并在整個(gè)關(guān)鍵操作過程中保持手套的無菌性(避免觸碰非無菌表面)。
 
動(dòng)作要準(zhǔn)確、迅速、輕柔,減少空氣流動(dòng)和產(chǎn)生氣溶膠。
 
避免對(duì)著樣品說話、咳嗽或打噴嚏。
 
5、無菌技術(shù):
 
火焰滅菌:在無菌區(qū)域外操作時(shí),常使用酒精燈或本生燈對(duì)工具(如鑷子、剪刀、容器口)進(jìn)行火焰滅菌。
 
避免交叉污染:無菌器具只能接觸無菌物品或樣品本身,接觸后即視為有污染風(fēng)險(xiǎn),不可再直接接觸其他無菌物品。
 
最小化暴露:無菌容器僅在需要放入樣品時(shí)才打開,打開后應(yīng)盡量保持容器口向下或處于保護(hù)狀態(tài)(如在火焰附近),并盡快關(guān)閉。
 
無菌轉(zhuǎn)移:樣品從一個(gè)無菌容器轉(zhuǎn)移到另一個(gè)時(shí),需確保轉(zhuǎn)移路徑和工具的無菌性。
 
二、無菌取樣的關(guān)鍵步驟:
 
1、準(zhǔn)備:
 
明確取樣目的、樣品類型和所需體積/數(shù)量。
 
準(zhǔn)備并確認(rèn)所有所需無菌器具、容器、運(yùn)輸介質(zhì)(如適用)均已滅菌且在有效期內(nèi)。
 
穿戴好個(gè)人防護(hù)裝備(PPE),并進(jìn)行手部消毒。
 
準(zhǔn)備好消毒劑用于樣品接觸點(diǎn)的消毒。
 
設(shè)定好無菌工作區(qū)域(如開啟超凈臺(tái)/生物安全柜并運(yùn)行足夠時(shí)間)。
 
2、取樣點(diǎn)消毒(如適用):對(duì)于需要從特定表面或開口(如瓶口、罐口、管道接口、皮膚穿刺點(diǎn))取樣的,必須先用合適的消毒劑對(duì)接觸點(diǎn)進(jìn)行徹底消毒,并等待其完全干燥,以避免消毒劑殘留抑制微生物或污染樣品。
 
3、取樣操作:
 
在無菌區(qū)域(如超凈臺(tái)內(nèi))或嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范進(jìn)行。
 
打開無菌容器或包裝時(shí),注意手法,避免手或非無菌物品接觸內(nèi)部或邊緣。
 
使用無菌工具(鑷子、注射器、拭子等)獲取樣品。
 
操作迅速、準(zhǔn)確,避免工具或樣品在空氣中暴露過久。
 
避免手部或非無菌物體越過打開的容器或樣品上方。
 
取樣工具只能接觸樣品一次,如需再次取樣,應(yīng)更換新工具。
 
4、樣品封裝:
 
將取得的樣品立即、小心地放入無菌容器中。
 
確保容器密封良好,防止泄漏和后續(xù)污染。
 
在容器上清晰、準(zhǔn)確地標(biāo)記樣品信息(如樣品編號(hào)、名稱、取樣日期時(shí)間、取樣人、取樣位置等)。
 
5、運(yùn)輸與儲(chǔ)存:
 
根據(jù)樣品特性和檢測(cè)要求,在規(guī)定的條件下(如冷藏、冷凍、常溫避光)及時(shí)運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。
 
使用合適的運(yùn)輸容器(如保溫箱+冰袋),確保運(yùn)輸過程不會(huì)破壞樣品的無菌狀態(tài)或影響目標(biāo)微生物的存活。
 
6、記錄:
 
詳細(xì)記錄取樣過程,包括取樣時(shí)間、地點(diǎn)、方法、使用的器具、消毒方法、操作人員、環(huán)境條件(如潔凈度級(jí)別)、樣品標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸條件等。這對(duì)于結(jié)果追溯和質(zhì)量控制至關(guān)重要。
 
三、應(yīng)用場(chǎng)景舉例:
 
醫(yī)療:采集血液、腦脊液、尿液、膿液、組織活檢樣本用于微生物培養(yǎng)。
 
制藥:在生產(chǎn)過程中或最終產(chǎn)品中取樣進(jìn)行無菌檢查、微生物限度檢查、內(nèi)毒素檢測(cè)。
 
生物制品/細(xì)胞治療:細(xì)胞培養(yǎng)物的傳代、凍存或檢測(cè)取樣。
 
食品與飲料:原料、生產(chǎn)線(設(shè)備表面、中間產(chǎn)品、水、空氣)、成品的微生物檢測(cè)取樣。
 
化妝品:成品或原料的微生物檢測(cè)取樣。
 
環(huán)境監(jiān)測(cè):潔凈室/區(qū)的空氣、表面、人員(接觸碟)的微生物監(jiān)測(cè)取樣。
 
科研:無菌動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、無菌培養(yǎng)基配制、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(避免DNA酶/RNA酶污染也類似無菌概念)。
 
四、總結(jié):
 
無菌取樣是一項(xiàng)需要高度嚴(yán)謹(jǐn)性、規(guī)范操作和豐富經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)。它要求操作者深刻理解無菌概念,熟練掌握無菌操作技術(shù),并在每個(gè)細(xì)節(jié)上都嚴(yán)格遵守規(guī)程。任何環(huán)節(jié)的疏忽都可能導(dǎo)致取樣失敗,得到不可靠的結(jié)果,甚至造成嚴(yán)重后果。因此,接受專業(yè)培訓(xùn)、遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)并進(jìn)行充分的實(shí)踐是保證無菌取樣成功的關(guān)鍵。
 
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  • 下載附件
  • 上一篇:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中PBS緩沖液的主要用途與使用方法及注意事項(xiàng)!
  • 下一篇:潔凈室微生物環(huán)境檢測(cè)易出現(xiàn)的問題及關(guān)鍵的解決策略!
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