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1、適應(yīng)癥
⑴呼吸系統(tǒng)感染的癥狀：發(fā)熱、咳嗽、痰多（如泡沫血痰、鐵銹色痰、膿痰）、咯血、呼吸困難等。
⑵呼吸系統(tǒng)感染性疾?。罕歉]炎、咽炎、扁桃體炎、支氣管炎、肺炎、肺膿腫、肺結(jié)核、猩紅熱、百日咳、白喉等。
2、標(biāo)本采集
呼吸道標(biāo)本應(yīng)該在抗菌藥物應(yīng)用之前采集，采集過程中盡量避免口腔正常菌群的污染。標(biāo)本采集后立即送檢，避免少量污染細(xì)菌過度生長。若不能及時送檢的標(biāo)本暫放4℃冰箱，若分離培養(yǎng)肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，不能放4℃冰箱。
⑴咽拭子采集法：用棉拭子采集病人咽后壁或懸雍垂的后側(cè)，反復(fù)涂抹數(shù)次；采集白喉標(biāo)本時要擦拭咽、鼻粘膜、偽膜部分和深層組織的分泌物，并立即送檢。
⑵鼻咽拭子采集法：鼻咽拭子是一端彎曲的金屬棉拭子（有商品），經(jīng)鼻腔進(jìn)入鼻咽部采集標(biāo)本，置于運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。
⑶鼻咽管采集法：用細(xì)鼻飼管從鼻腔進(jìn)入到鼻咽部，用負(fù)壓吸引器吸取鼻咽部分泌物并放入無菌容器內(nèi)送檢。用于病毒培養(yǎng)的標(biāo)本，最好在床邊接種，否則放冰壺內(nèi)立即送檢。
⑷痰液標(biāo)本采集法
①咳痰：病人晨起用清水漱口數(shù)次，以便將口腔內(nèi)正常菌群漱出。指導(dǎo)病人用力咳出呼吸道深部的痰液，置無菌容器中送檢。痰量少者可采用加溫45℃左右的10%氯化鈉溶液霧化吸入，使痰液容易排出。
②吸痰管吸痰：對嚴(yán)重感染而又無力咳痰或昏迷病人可采用吸痰管吸痰。
③用防污染纖維支氣管鏡刷直接取得痰液或采集肺泡灌洗液，放置無菌容器中。④氣管穿刺法：懷疑厭氧菌引起的肺部感染，可通過氣管穿刺取得痰液。
3、常見病原體的檢查
⑴直接涂片檢查
①痰液細(xì)胞檢查：挑取膿性痰液加蓋玻片，在低倍鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞和鱗狀上皮細(xì)胞的數(shù)量，每個視野多形核白細(xì)胞≥25個，鱗狀上皮細(xì)胞＜10個，表明是下呼吸道的感染標(biāo)本，適合做細(xì)菌培養(yǎng)。軍團(tuán)菌和結(jié)核菌培養(yǎng)不受此影響。
②肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumonia ）：痰液直接涂片、革蘭染色鏡檢，見到革蘭陽性雙球菌，呈矛頭狀排列，有的帶有莢膜，結(jié)合臨床可初步診斷。
③結(jié)核分枝桿菌：高壓滅菌后挑取痰液在潔凈無劃痕玻片上均勻涂片、厚度適宜，進(jìn)行抗酸染色，油鏡檢查見到抗酸染色陽性及形態(tài)特點(diǎn)似結(jié)核菌時，報(bào)告“找到抗酸桿菌”。
④白喉棒狀桿菌（Corynebacterium diphtheriae）：將分泌物涂片，采用Neisser或Albert法染色，鏡下見到革蘭陽性桿菌，排列不規(guī)則，呈V、Y及柵欄狀排列，有明顯異染顆粒，可報(bào)告見到革蘭陽性棒狀桿菌。
⑵分離培養(yǎng)與鑒定
①定量細(xì)菌培養(yǎng)：對痰標(biāo)本或肺泡灌洗液進(jìn)行定量細(xì)菌培養(yǎng)，計(jì)算每毫升中不同種類的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml），并鑒定細(xì)菌。
②肺炎鏈球菌：肺炎鏈球菌在血平板上菌落為扁平、表面光滑、周圍有草綠色溶血環(huán)，有的菌落中央塌陷，呈臍窩狀。該菌膽汁溶菌試驗(yàn)陽性、發(fā)酵菊糖、Optochin敏感試驗(yàn)陽性，小白鼠毒力試驗(yàn)陽性等。
③流感嗜血桿菌（Heamophilus influenzae）：將標(biāo)本接種在巧克力選擇瓊脂平板上，放置含5%~10%CO２環(huán)境培養(yǎng)。細(xì)菌與金黃色葡萄球菌一起培養(yǎng)時有“衛(wèi)星現(xiàn)象”（satellite phenomenon）。菌體為多形性革蘭陰性小桿菌。根據(jù)生長需要Ｘ、Ｖ因子、生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌。
④軍團(tuán)菌（Legionella）：標(biāo)本接種在活性炭酵母浸膏培養(yǎng)基上（BCYE）培養(yǎng)，只能在BCYE培養(yǎng)基上生長的革蘭陰性桿菌（不易著色），結(jié)合生化反應(yīng)和血清學(xué)分型鑒定細(xì)菌。
⑤結(jié)核分枝桿菌：痰液或支氣管肺泡灌洗液經(jīng)處理雜菌后接種培養(yǎng)。（與尿結(jié)核菌培養(yǎng)方法相同）。
⑥肺炎支原體（Mycoplasma pneumonia）：肺炎支原體對營養(yǎng)要求比較高，培養(yǎng)基中需加入小牛血清和新鮮酵母液等。將采集的咽拭子標(biāo)本、支氣管分泌物、鼻咽洗液、痰等標(biāo)本接種于液體和固體選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)１～２周，結(jié)合菌落生長特性和生化反應(yīng)鑒定。因肺炎支原體培養(yǎng)時間長而且陽性率很低，臨床常采用血清學(xué)或分子生物學(xué)方法檢測。
⑦肺炎衣原體和呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒等不同病毒需選擇不同的敏感細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)。
4、臨床意義
⑴病毒感染：流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和冠狀病毒等為呼吸道感染的常見病毒，免疫功能低下者如嬰幼兒、老年人、癌癥患者、器官移植病人等易發(fā)生感染。引起嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）的新型冠狀病毒在2003年的流行中，中青年感染者居多。不同種類病毒引起的臨床表現(xiàn)和造成的嚴(yán)重程度不同，如較重者患有急性和慢性支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎和急性肺炎。甲型流感病毒易發(fā)生變異，新變異株除散發(fā)流感外，還引起爆發(fā)流行。近年，巨細(xì)胞病毒（CMV）引起的肺炎有增加趨勢。病毒性肺炎嚴(yán)重者發(fā)生死亡。
⑵細(xì)菌感染：下呼吸道細(xì)菌感染是導(dǎo)致病人死亡的一個主要原因。臨床常見感染有急性和慢性氣管炎、支氣管炎、肺炎、肺膿腫、胸腔膿腫、肺結(jié)核病等。常見感染細(xì)菌有肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、卡他布蘭漢菌、銅綠假單胞菌、產(chǎn)ESBL大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌、沙雷菌、不動桿菌、流感嗜血桿菌等。肺膿腫常常伴有厭氧菌感染，偶見奴卡菌或放線菌感染。嗜肺軍團(tuán)菌肺炎及其小型爆發(fā)，國內(nèi)有不少報(bào)道。近年，結(jié)核病有回升趨勢，而且結(jié)核分枝桿菌多重耐藥菌株也不斷增加，全球每天約有8000人死于結(jié)核病，世界衛(wèi)生組織已將結(jié)核病作為重點(diǎn)控制的傳染病之一。此外，非結(jié)核分枝桿菌感染有增多趨勢。白喉棒狀桿菌引起傳染病白喉（diphtheria），細(xì)菌在咽部粘膜上繁殖，形成白色偽膜，繼而發(fā)生在喉部或氣管內(nèi)，容易造成窒息死亡。目前，該病幾乎絕跡。
由于病人自然咳出的痰容易被口腔正常菌群污染，痰培養(yǎng)生長的細(xì)菌，有時難以評價是否有臨床意義，通過對痰質(zhì)量的評定和定量細(xì)菌培養(yǎng)，尚有一定的參考價值。當(dāng)痰細(xì)菌計(jì)數(shù)≥106CFU/ml或經(jīng)纖維支氣管鏡、人工氣道吸引采集的下呼吸道分泌物細(xì)菌計(jì)數(shù)≥105CFU/ml、支氣管肺泡灌洗液細(xì)菌計(jì)數(shù)≥104CFU/ml和防污染支氣管肺泡灌洗液（PBAL）細(xì)菌計(jì)數(shù)≥103CFU/ml時，具有臨床診斷意義。
⑶真菌感染：免疫功能低下者如白血病病人和其他長期應(yīng)用抗菌素治療的重癥病人，容易引起真菌性肺炎。病原真菌常以白念珠菌為主，其他可見曲霉菌、毛霉菌、組織胞漿菌等。AIDS患者易發(fā)生卡氏肺孢子菌（pneumocystis carinii）感染。
⑷支原體感染：肺炎支原體是人類原發(fā)性非典型肺炎（primary atypical pneumoniae, PAP）的主要病原體之一，肺炎支原體主要經(jīng)飛沫傳播，可導(dǎo)致疾病的流行，兒童及青少年多見發(fā)病。
⑸衣原體感染：肺炎衣原體(Chlamydia pneumonia)在人之間通過飛沫傳播，引起支氣管炎、肺炎等，兒童和青少年容易感染，感染率為10%左右。我國成人肺炎衣原體抗體陽性率高達(dá)50%左右。鸚鵡熱衣原體肺炎是由于人接觸鳥類而感染。新生兒沙眼衣原體肺炎多因其在分娩過程中感染所致。