李斯特菌(ATCC菌種53 XXIII）的驗證方法
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-08-28 17:06:41
ATCC菌種中文名：李斯特菌
Listeria monocytogenes (Murray et al.) Pirie 拉丁名
(ATCC? 15313?) 統(tǒng)一編號
Strain Designations 別名 53 XXIII
李斯特菌（學(xué)名：Listeria monocytogenes），又名單核球增多性李斯特菌、李氏菌，是一種兼性厭氧細(xì)菌，為李斯特菌癥的病原體。李斯特菌是革蘭氏陽性菌，屬厚壁菌門，取名自約瑟夫·李斯特。其特點是：分布廣、生存環(huán)境可塑性大、適應(yīng)范圍大等。
一、驗證時，挑取5個典型的菌落，每個菌落劃線接種到胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSYEA）上，置于35℃或37℃需氧培養(yǎng)24?48h,分離平板上的單個菌落以確保菌株的純度。
二、檢查TSYEA平板上生長的單個菌落,使用亨利描述的菌落特征進行分離。亨利認(rèn)為李斯特菌在TYS平板上生成細(xì)小的、半透明的菌落，菌落呈藍色、藍綠色或藍灰色，菌落表面為細(xì)小的顆粒狀,類似于粗糙的磨砂玻璃。
從TSYES平板上挑取一個單個的菌落，分別接種于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉湯
TSYEB試管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂TSYEA斜面上，25℃培養(yǎng)18?24h。
三、①用TSYEB肉湯培養(yǎng)物進行菌體運動試驗和革蘭氏染色。李斯特菌屬呈翻筋斗運動，注意與振蕩培養(yǎng)后非病性 李斯特菌的快速直線運動進行區(qū)別。李斯特菌為小的、革蘭氏陽性的、無孢子的短桿菌。
②用TSYEB斜面上的生長物進行過氧化氫酶和氧化酶試驗。李斯特菌過氧化氫酶試驗陽性，氧化酶試驗陰性。
③用TSYEB斜面上的培養(yǎng)物接種下列培養(yǎng)基，進行驗證和鑒定試驗：
接種硝酸鹽蛋白胨水，檢査硝酸鹽的產(chǎn)生情況。在35℃或37℃培養(yǎng) 5d。
使用金黃色葡萄球菌和馬紅球菌進行CAMP試驗。在35℃或37℃培養(yǎng)24h
接種D-葡萄糖、D-水楊苷、L-鼠李糖、D-木糖發(fā)酵肉湯(含有溴甲酚紫；置35℃或37℃培養(yǎng)7d每天檢查產(chǎn)酸的情況
四、李斯特菌能水解七葉甘，除格氏李斯特菌外，其他李斯特菌均不能分解甘露醇產(chǎn)酸。在牛津瓊脂平板上，李斯特菌菌落直徑為2?3mm，帶有黑褐色或黑色暈輪（七葉苷水解所形成），菌落的中心經(jīng)常是下凹的；在PALCAM瓊脂上，李斯特菌菌落直徑為1.5?2mm，綠色并帶有黑色的暈輪（或菌落中心為黑色）。
另外李斯特菌在環(huán)境中無處不在，在絕大多數(shù)食品中都能找到李斯特菌。肉類、蛋類、禽類、海產(chǎn)品、乳制品、蔬菜等都已被證實是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒嚴(yán)重的可引起血液和腦組織感染，很多國家都已經(jīng)采取措施來控制食品中的李斯特菌，并制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。