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病毒動(dòng)物的三種接種法(小白鼠)
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-08-18 22:01:54

      中國微生物菌種查詢網(wǎng)首先根據(jù)研究目的選擇動(dòng)物種類,對(duì)病毒致病機(jī)制的研究,選擇的動(dòng)物越接近人類的高等動(dòng)物, 研究結(jié)果越有價(jià)值;其次要注意動(dòng)物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素,一般年幼的動(dòng)物比成年動(dòng)物對(duì)病毒的敏感性高。至于接種的途徑應(yīng)根據(jù)病毒的嗜性決定。今天小編選擇接種的是小白鼠,同時(shí)采用了鼻內(nèi)接種,腦內(nèi)接種和尾靜脈接種三種接種方法。下面小編就把這三種方法一一列出僅供參考!
一、小白鼠腦內(nèi)接種
材料:
腦炎病毒(小白鼠腦脊髓炎病毒)懸液。腦組織先用無菌生理鹽水洗去血液,再加10%脫脂奶鹽水研磨成10-1 懸液,然后用3000 轉(zhuǎn)/分離心沉淀30 分鐘,吸取上清液供接種用。
小白鼠:3 周齡,體重6~8 克。無菌 0.25 毫升注射器及針頭(4 號(hào))、煮針鍋、碘酊、棉簽。
接種方法:
1. 以無菌0.25 毫升注射器抽取腦炎病毒懸液0.1 毫升,去除注射器內(nèi)的氣泡。
2. 取出小白鼠,左手將小白鼠固定,固定時(shí)用大拇指和食指捏住小白鼠的頭部,左手手掌輕輕按住小白鼠的體部。
3. 右手以棉簽蘸以碘酒,消毒小白鼠顳部皮毛(不碰到眼)。
4. 右手拿注射器在小白鼠顳部(眼與耳根連線的中點(diǎn)略偏耳朵的方向)刺入,進(jìn)入顱腔,進(jìn)針2~3 毫米,不要插得太深,注射量為0.02~0.03 毫升。
5. 注射完畢,將用過得注射器放入煮針鍋內(nèi)煮沸消毒。動(dòng)物一般在3~4 天后開始發(fā)病,食欲減退,活動(dòng)遲鈍,毛聳,震顫,慢慢發(fā)展為麻痹,癱瘓而死亡。
二、小白鼠鼻內(nèi)接種 
材料:
流感病毒鼠肺適應(yīng)株病毒懸液、無菌小試管、無菌毛細(xì)管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。
接種方法:
1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶?jī)?nèi)。左手握小瓶,右手抓住小白鼠,將其頭部塞入瓶口,進(jìn)行全身麻醉。注意麻醉深度,不宜太淺或太深,太深時(shí)易遭致麻醉死亡或非特異性吸入性肺炎,太淺則易在滴種時(shí)打噴嚏。
2. 用無菌毛細(xì)吸管吸取病毒懸液少許,連同毛細(xì)吸管插在無菌試管中備用。
3. 用左手將小白鼠握在手掌中,大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置,另一手取事先吸有病毒懸液的吸管,慢慢滴出一點(diǎn)于滴管口而不使其自然掉落,呈懸滴狀。將懸滴靠近動(dòng)物鼻尖,動(dòng)物在呼吸時(shí)自然吸入,一般為0.03~0.05 毫升,不宜過多。
4. 小白鼠慢慢蘇醒,在飼養(yǎng)盒中逐日開始發(fā)病,發(fā)病的癥狀常為毛聳、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸體可觀察到肺炎或血性病灶。
三、小白鼠尾靜脈接種
材料:
1. 病毒懸液
2. 碘酒、酒精、二甲苯、無菌0.25ml 注射器、4 號(hào)針頭及小鋁匣
接種方法:
1. 將小白鼠固定在小鋁匣內(nèi),露出尾部,用碘酒消毒尾部,然后用酒精棉球連
續(xù)擦尾部皮膚(必要時(shí)用二甲苯擦)使血管擴(kuò)張。
2. 尾背和左右兩側(cè)三根血管皆為靜脈,可選一根擴(kuò)張較好的靜脈作接種用。左手拇指捏住尾部的遠(yuǎn)端,向下彎45°,右手持注射器,于彎處進(jìn)針靜脈,推液0.1毫升。
注意:推注時(shí)遇阻力且皮下隆起發(fā)白時(shí),表示針頭不在血管內(nèi)應(yīng)拔出重新進(jìn)針;如針頭在血管內(nèi),推注時(shí)不感阻力,且可看到血管中血液由于注入液體而后退。接種后逐日觀察動(dòng)物發(fā)病情況。

提示:在病毒學(xué)研究中,動(dòng)物接種時(shí)為避免動(dòng)物本身可能帶有病毒,多采用實(shí)驗(yàn)室自己繁殖的動(dòng)物。

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