真空冷凍干燥法如何保藏克氏庫克菌
簡單的說真空冷凍干燥法就是將微生物冷凍，在減壓下利用升華作用除去水分，使細胞的生理活動趨于停止，從而長期維持存活狀態(tài)。
下面就來看一下真空冷凍干燥法如何保藏克氏庫克菌：
1、先要檢驗菌種的純度。將克氏庫克菌在營養(yǎng)豐富且容易增菌的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)為宜;菌齡以達到對數(shù)生長期為好;若未有芽孢或孢子的微生物，則以芽孢和孢子形成以后進行保存為好;菌液濃度以高為好?！?br />
2、準備安瓿管
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。
3、保護劑的選擇和準備
配制保護劑時，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。
4、 凍干樣品的準備
在最適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進行純度檢查后與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短，最好在1-2小時內分裝完畢并預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。
5、 預凍
一般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。
6、 冷凍干燥
采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。
將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。
7、 真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
8、保藏
安瓿管應低溫避光保藏。
最后一項就是質量檢查：從冷凍干燥后的菌種中抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查，如存活率、生產能力、形態(tài)變異、雜菌污染等等。
Kocuria kristinae (Kloos et al.) Stackebrandt et al. 拉丁名
(ATCC? 27572?) 統(tǒng)一編號
Deposited As Micrococcus kristinae Kloos et al.
Strain Designations 別名 AW 204
Application 用途 Characterization
Isolation 分離源 Human skin
Biosafety Level 生物安全等級 1
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
Product Format 提供形式 freeze-dried
Preceptrol? no
Type Strain 模式菌株 no
Medium 培養(yǎng)基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient broth
Growth Conditions 生長條件
Temperature 培養(yǎng)溫度 : 30.0°C
Name of Depositor 寄存者 WE Kloos
References 參考文獻 Kloos WE, et al. Isolation and characterization of micrococci from human skin, including two new species: Micrococcus lylae and Micrococcus kristinae. Int. J. Syst. Bacteriol. 24: 79-101, 1974.