中國(guó)微生物菌種網(wǎng)為您分享瓊脂擴(kuò)散的試驗(yàn)方法
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-07-20 10:59:42
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1、單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：是一種常用的定量檢測(cè)抗原的方法。將適量抗體與瓊脂混勻，澆注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò)散，邊擴(kuò)散邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時(shí)間后，在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。
2、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：是將半固體瓊脂傾注于平皿內(nèi)或玻片上，待其凝固后，在瓊脂板上打孔，將抗原、抗體分別注入小孔內(nèi)，使兩者相互擴(kuò)散。如果抗原、抗體相互對(duì)應(yīng)，濃度、比例適當(dāng)，則一定時(shí)間后，在抗原、抗體孔之間出現(xiàn)清晰可見的沉淀線。雙向瓊脂擴(kuò)散法可用來(lái)分析溶液中的多種抗原。一對(duì)抗原、抗體系統(tǒng)只能形成一條沉淀線，不同的抗原抗體系統(tǒng)在瓊脂中擴(kuò)散的速度不同，可在瓊脂中形成不同的沉淀線。本法主要是用于檢測(cè)血清中各種免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺點(diǎn)是需要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，靈敏度不高。
另外注意：
第一：不規(guī)則的沉淀線可能是加樣過(guò)滿溢出、孔型不規(guī)則、邊緣開裂、孔底滲漏、孵育時(shí)沒(méi)放水平、擴(kuò)散時(shí)瓊脂變干燥、溫度過(guò)高蛋白質(zhì)變性或未加防腐劑導(dǎo)致細(xì)菌污染等所致。
第二：抗原抗體的比例與沉淀帶的位置、清晰度有關(guān)。如抗原過(guò)多，沉淀帶向抗體孔偏移和增厚，反之亦然。可用不同稀釋度的反應(yīng)液試驗(yàn)后調(diào)節(jié)。
