幽門螺旋菌的特征、培養(yǎng)及診斷
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-04-06 08:03:57
幽門螺旋菌的特征、培養(yǎng)及診斷
幽門螺桿菌，Helicobacter pylori，簡(jiǎn)稱Hp。首先由巴里·馬歇爾(Barry J. Marshall)和羅賓·沃倫(J. Robin Warren)二人發(fā)現(xiàn)，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。
形態(tài)學(xué)特征
幽門螺桿菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌。長(zhǎng)2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。革蘭染色陰性。有動(dòng)力。在胃粘膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，除典型的形態(tài)外，有時(shí)可出現(xiàn)桿狀或圓球狀。
電子顯微鏡下，菌體的一端可伸出2～6條帶鞘的鞭毛。在分裂時(shí)，兩端均可見(jiàn)鞭毛。鞭毛長(zhǎng)約為菌體1～1.5倍。粗約為30nm。鞭毛的頂端有時(shí)可見(jiàn)一球狀物，實(shí)為鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可見(jiàn)一個(gè)圓球狀根基伸入菌體頂端細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)。在其內(nèi)側(cè)尚有一電子密度降低區(qū)域。鞭毛在運(yùn)動(dòng)中起推進(jìn)器作用，在定居過(guò)程中起拋錨作用。
生理學(xué)和分子生物學(xué)特征
幽門螺桿菌是微需氧菌，環(huán)境氧要求5～8%，在大氣或絕對(duì)厭氧環(huán)境下不能生長(zhǎng)。許多固體培養(yǎng)基可作幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補(bǔ)充物方能生長(zhǎng)。常以萬(wàn)古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長(zhǎng)。
幽門螺桿菌對(duì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)中常用于鑒定腸道細(xì)菌的大多數(shù)經(jīng)典生化實(shí)驗(yàn)不起反應(yīng)。而氧化酶、觸酶、尿素酶、堿性磷酸酶、r－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、亮氨酸肽酶這七種酶反應(yīng)是作為幽門螺桿菌生化鑒定的依據(jù)。
幽門螺桿菌的全基因序列已經(jīng)測(cè)出，其中尿素酶基因有四個(gè)開(kāi)放性讀框，分別是UreA、 UreB、 UreC 和UreD。UreA和UreB編碼的多肽與尿素酶結(jié)構(gòu)的兩個(gè)亞單位結(jié)構(gòu)相當(dāng)。幽門螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當(dāng)于變形桿菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保護(hù)細(xì)菌在高酸環(huán)境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分別編碼空泡毒素和細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白。
根據(jù)這兩種基因的表達(dá)情況，又將幽門螺桿菌菌株分成兩種主要類型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表達(dá)兩種蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表達(dá)兩種蛋白，尚有一些為中間表達(dá)型，即表達(dá)其中一種毒力因子?，F(xiàn)在多認(rèn)為Ⅰ型與胃疾病關(guān)系較為密切。
培養(yǎng)
用于培養(yǎng)的胃粘膜活檢標(biāo)本應(yīng)置于生理鹽水、營(yíng)養(yǎng)肉湯或20％葡萄糖中，然后立即轉(zhuǎn)送到細(xì)菌室培養(yǎng)。如果標(biāo)本不能在4個(gè)小時(shí)內(nèi)培養(yǎng)，就應(yīng)放在4攝氏度保存，但不宜超過(guò)24小時(shí)。長(zhǎng)期保存用于培養(yǎng)的活檢標(biāo)本的唯一方法是將其置于－70攝氏度或液氮之中。
培養(yǎng)幽門螺桿菌的培養(yǎng)基包括非選擇性及選擇性兩種。常用的非選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂以及Wilkins-Chalgren瓊脂。培養(yǎng)基中需加7％－10％的去纖維蛋白馬血。羊血、人血、馬血清、氯化血紅素、淀粉、膽固醇或環(huán)糊精(cyclodextrins） 也可代替馬血。選擇培養(yǎng)基則是在上述 培養(yǎng)基中添加一定的抗菌藥物，如萬(wàn)古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B以及甲氧芐氨嘧啶（TMP）。
常用的有Skirrow 配方及Dent 配方。前者原用于彎曲菌的培養(yǎng)，亦可用于幽門螺桿菌培養(yǎng)。后者為前者的改良，即將多粘菌素用頭孢磺啶取代，因?yàn)樯贁?shù)（5％左右）幽門螺桿菌菌株對(duì)多粘菌素敏感。Drnt配方為萬(wàn)古霉素（10mg／L）、頭孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性霉素B（5mg／L）。有報(bào)道指出，部分菌株對(duì)啶酸敏感，因而培養(yǎng)基中應(yīng)盡量避免作用該抗生素。
幽門螺旋桿菌感染檢測(cè)方法
幽門螺旋桿菌感染的檢查方法很多，主要包括細(xì)菌的直接檢查、尿毒酶活性測(cè)定、免疫學(xué)檢測(cè)及聚合酶鏈反應(yīng)等方法。
(1) 細(xì)菌的直接檢查
是指通過(guò)胃鏡檢查鉗取胃粘膜(多為胃竇粘膜)作直接涂片、染色，組織切片染色及細(xì)菌培養(yǎng)來(lái)檢測(cè)幽門螺旋桿菌。其中胃粘膜細(xì)菌培養(yǎng)是診斷幽門螺旋桿菌最可靠的方法，可作為驗(yàn)證其他診斷性試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，同時(shí)又能進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，指導(dǎo)臨床選用藥物。
(2) 尿毒酶檢查
因?yàn)橛拈T螺旋桿菌是人胃內(nèi)唯一能夠產(chǎn)生大量尿毒酶的細(xì)菌，故可通過(guò)檢測(cè)尿毒酶來(lái)診斷幽門螺旋桿菌感染。尿毒酶分解胃內(nèi)尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素濃度降低、氨濃度升高?；诖嗽硪寻l(fā)展了多種檢測(cè)方法：①胃活檢組織尿毒酶試驗(yàn)；②呼吸試驗(yàn)；③胃液尿素或尿素氮測(cè)定；④15N-尿素試驗(yàn)。
(3) 免疫學(xué)檢測(cè)
目前已有多種免疫學(xué)檢測(cè)方法，通過(guò)測(cè)定血清中的幽門螺旋桿菌抗體來(lái)檢測(cè)幽門螺旋桿菌感染，包括補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、被動(dòng)血凝測(cè)定、免疫印跡技術(shù)和酶聯(lián)合吸附測(cè)定(ELISA)等。
(4) 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)
正常胃粘膜很少檢出幽門螺旋桿菌(0～6%)，慢性胃炎患者幽門螺旋桿菌的檢出率很高，約50%～80%，慢性活動(dòng)性胃炎患者幽門螺旋桿菌檢出率則更高，達(dá)90%以上。
(5) C－14呼氣檢測(cè)儀＋呼氣檢測(cè)口袋
只需要吹氣5分鐘外，無(wú)其他任何不適。 該方法使眾多高血壓、心臟病及對(duì)胃鏡過(guò)敏的患者避免了做胃鏡的不適感，是目前理想的檢測(cè)方法之一。是目前檢測(cè)HP的醫(yī)學(xué)界的金標(biāo)準(zhǔn).敏感性95%，特異性95%~100%。
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