志賀氏菌增菌肉湯的工作原理與實驗現(xiàn)象及具體操作步驟！
小楊 / 2025-11-19 09:59:08
一、志賀氏菌增菌肉湯的原理
志賀氏菌增菌肉湯是一種選擇性增菌培養(yǎng)基。它的主要目的不是讓志賀氏菌長得非常旺盛，而是在抑制大多數其他腸道細菌（特別是
大腸桿菌）的同時，允許志賀氏菌進行有限的生長，從而提高樣品中志賀氏菌的相對比例，便于后續(xù)的分離和鑒定。
其原理主要基于以下幾個關鍵成分和設計：
1、基礎營養(yǎng)物：
胰蛋白胨、牛肉浸粉等：提供氮源、維生素、氨基酸和碳源，滿足細菌生長繁殖的基本營養(yǎng)需求。
2、選擇性抑制劑（核心部分）：
脫氧膽酸鈉：這是一種膽鹽，也是核心的選擇性抑制劑。它能破壞革蘭氏陽性菌的細胞膜，并能抑制許多革蘭氏陰性桿菌（尤其是
大腸桿菌）的生長。志賀氏菌對脫氧膽酸鈉的耐受性相對較強，因此能在其存在的環(huán)境下存活并緩慢生長。
檸檬酸鈉/檸檬酸鹽：作為一種螯合劑，它能結合培養(yǎng)基中的鈣、鎂等二價陽離子。這些離子是許多細菌（如
大腸桿菌）表面酶的輔因子，缺少它們會導致細菌細胞膜通透性改變，從而抑制其生長。志賀氏菌對此相對不敏感。
葡萄糖：作為可發(fā)酵的碳水化合物，提供能量。
3、pH指示系統(tǒng)：
培養(yǎng)基中含有溴麝香草酚藍。這是一種pH指示劑，其變色范圍如下：
酸性 (pH < 6.0)：黃色
中性 (pH ≈ 6.0-7.6)：綠色
堿性 (pH > 7.6)：藍色
4、工作原理流程：
接種樣品后，如果樣品中含有志賀氏菌，它會利用葡萄糖進行發(fā)酵。
發(fā)酵過程會產生酸性產物，使培養(yǎng)基的pH值下降。
當pH降至6.0以下時，溴麝香草酚藍指示劑由綠色變?yōu)辄S色。
這個變酸的過程本身也會進一步抑制對酸敏感的其他雜菌（如
大腸桿菌），從而為志賀氏菌創(chuàng)造了更有利的選擇性環(huán)境。
總結來說：該培養(yǎng)基通過脫氧膽酸鈉和檸檬酸鹽的聯(lián)合作用，強力抑制雜菌；同時提供基本營養(yǎng)讓志賀氏菌生長；通過其發(fā)酵葡萄糖產酸使培養(yǎng)基變黃，這一酸性環(huán)境又形成二次選擇壓力，最終達到“富集”志賀氏菌的目的。
二、實驗現(xiàn)象
在接種樣品并進行培養(yǎng)后（通常在35-37°C下培養(yǎng)16-24小時），可以觀察到以下現(xiàn)象：
1、陽性結果（提示可能有志賀氏菌）
培養(yǎng)基顏色：由接種前的綠色或藍綠色變?yōu)辄S色或黃綠色。
渾濁度：培養(yǎng)基變得輕微渾濁，表明有細菌生長。
結論：顏色變黃表明有細菌發(fā)酵葡萄糖產酸，且該細菌能夠耐受培養(yǎng)基中的選擇性抑制劑。這是一個初步的陽性指示，需要立即轉種到選擇性更強的分離培養(yǎng)基（如SS瓊脂、XLD瓊脂或MAC瓊脂）上進行進一步分離和純化，然后通過生化試驗和血清學試驗進行確認。
2、陰性結果
培養(yǎng)基顏色：保持不變（綠色或藍綠色），或甚至可能變?yōu)楦畹乃{色。
不變色：說明沒有細菌生長，或生長的細菌不發(fā)酵葡萄糖。
變藍色：極少數情況下，如果污染的雜菌能分解蛋白產生堿性物質，會使培養(yǎng)基變藍，但這通常意味著嚴重污染。
渾濁度：澄清透明，無任何渾濁跡象。
結論：表明樣品中不含志賀氏菌，或志賀氏菌含量極低以致無法在抑制環(huán)境下生長。
3、非典型或干擾結果
培養(yǎng)基劇烈變黃并產生大量氣泡：這通常不是志賀氏菌的特征。志賀氏菌不產氣。這種現(xiàn)象更可能來自其他腸桿菌科細菌（如
大腸桿菌）的污染，它們可能未被完全抑制并大量產酸產氣。
培養(yǎng)基變黃但非常渾濁：雖然志賀氏菌生長會導致渾濁，但如果渾濁度非常高，也可能意味著選擇性抑制不完全，有其他耐受力強的雜菌大量生長。
三、注意事項
培養(yǎng)時間：不宜過長，通常為16-24小時。時間過長可能導致被抑制的雜菌恢復生長，干擾結果。
非100%特異性：該培養(yǎng)基是選擇性的，但不是特異性的。某些其他細菌（如某些
變形桿菌或
檸檬酸桿菌）也可能生長并導致培養(yǎng)基變黃。因此，增菌后的分離和確認步驟至關重要。
菌株差異：某些志賀氏菌菌株（特別是
宋內志賀氏菌）對脫氧膽酸鹽比較敏感，可能在該培養(yǎng)基中生長不佳。
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