微生物凍干粉菌種培養(yǎng)時(shí)防污染措施及具體操作規(guī)程！
小楊 / 2025-07-12 09:47:30
百歐博偉生物：在微生物凍干粉菌種培養(yǎng)過(guò)程中，防止污染是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和菌種純度的關(guān)鍵。污染可能來(lái)自環(huán)境、操作工具、操作人員或培養(yǎng)基本身，需通過(guò)嚴(yán)格的操作規(guī)范和環(huán)境控制來(lái)避免。以下是具體的防污染措施：
一、環(huán)境與區(qū)域控制
1、專用潔凈區(qū)域操作
在生物安全柜（BSC）、超凈工作臺(tái)或無(wú)菌室中進(jìn)行所有操作，操作前需啟動(dòng)設(shè)備至少 30 分鐘，確?？諝膺^(guò)濾和氣流穩(wěn)定。
定期對(duì)潔凈區(qū)域進(jìn)行消毒：用 75% 酒精擦拭臺(tái)面、側(cè)壁及設(shè)備表面，每周用紫外燈照射 30 分鐘以上（無(wú)人狀態(tài)），每月進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)（如沉降菌檢測(cè)）。
2、分區(qū)操作
將 “菌種復(fù)蘇區(qū)”“培養(yǎng)基制備區(qū)”“接種培養(yǎng)區(qū)” 嚴(yán)格分開，避免交叉污染（如培養(yǎng)基制備的污染物擴(kuò)散到接種區(qū)）。
二、培養(yǎng)基與試劑的無(wú)菌性保障
1、培養(yǎng)基的滅菌與驗(yàn)證
培養(yǎng)基需嚴(yán)格按照規(guī)定條件滅菌（如高壓蒸汽滅菌 121℃、15-30 分鐘），滅菌后通過(guò)無(wú)菌試驗(yàn)驗(yàn)證（37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)，觀察是否有雜菌生長(zhǎng)）。
避免使用過(guò)期、結(jié)塊或外觀異常（如渾濁、沉淀、霉斑）的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基若有絮狀物或顏色異常需立即丟棄。
2、試劑與耗材的無(wú)菌處理
接種環(huán)、移液槍頭、試管、培養(yǎng)皿等需經(jīng)干熱滅菌（160-180℃、2-3 小時(shí)）或高壓滅菌，滅菌后妥善存放于無(wú)菌容器中，避免開封后暴露在非潔凈環(huán)境。
液體試劑（如稀釋液、緩沖液）需滅菌后使用，瓶口需用 75% 酒精消毒后再開啟。
三、操作工具的無(wú)菌處理
1、接種工具的滅菌
接種環(huán)/針每次使用前后需在酒精燈火焰上灼燒至紅熱（全程避免觸碰非無(wú)菌區(qū)域），冷卻后再接觸菌種或培養(yǎng)基（避免高溫殺死目標(biāo)菌）。
移液槍使用無(wú)菌槍頭，每換一種試劑或樣本需更換槍頭，避免交叉污染。
2、容器的無(wú)菌操作
試管、培養(yǎng)皿的蓋子打開后，開口朝下或斜放，避免直接暴露于空氣中；操作完畢后立即蓋緊，減少暴露時(shí)間。
凍干粉安瓿瓶開啟前，需用 75% 酒精擦拭外壁，砂輪劃痕后再次消毒，折斷時(shí)避免玻璃碎屑落入菌粉中（可在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)完成）。
四、操作人員的規(guī)范操作
1、個(gè)人防護(hù)與手部消毒
操作前需更換無(wú)菌實(shí)驗(yàn)服、戴無(wú)菌手套（手套需用 75% 酒精擦拭消毒），必要時(shí)戴口罩、帽子，避免頭發(fā)、皮膚碎屑或呼吸飛沫污染。
每次操作前、接觸非無(wú)菌物品后，需用 75% 酒精消毒手部或更換手套。
2、嚴(yán)格的無(wú)菌操作流程
凍干粉復(fù)蘇時(shí)，溶解液（如無(wú)菌生理鹽水、培養(yǎng)基）需緩慢注入安瓿瓶，輕輕混勻，避免劇烈震蕩導(dǎo)致液體飛濺。
接種時(shí)，試管口、培養(yǎng)皿邊緣需在酒精燈火焰附近（約 5-10cm）操作，利用火焰形成的無(wú)菌氣流屏障減少污染。
避免在操作區(qū)域交談、咳嗽，頭部不要過(guò)度靠近敞口的容器，操作速度適中，避免慌亂導(dǎo)致失誤。
五、培養(yǎng)過(guò)程的監(jiān)控
1、培養(yǎng)環(huán)境的清潔
培養(yǎng)箱需定期消毒（如用 75% 酒精擦拭內(nèi)壁，或用甲醛熏蒸），托盤內(nèi)的冷凝水需及時(shí)清理（避免細(xì)菌滋生），不同菌種的培養(yǎng)皿需分開存放，標(biāo)注名稱和日期。
觀察培養(yǎng)物時(shí)，需在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)打開培養(yǎng)皿，避免在普通環(huán)境中暴露；發(fā)現(xiàn)疑似污染的培養(yǎng)物（如雜菌菌落、培養(yǎng)基渾濁）需單獨(dú)處理，避免交叉污染其他樣本。
2、污染后的處理
若發(fā)現(xiàn)污染，立即停止操作，污染的培養(yǎng)物、耗材需高壓滅菌后再處理，操作區(qū)域用含氯消毒劑徹底消毒，排查污染源頭（如設(shè)備故障、操作失誤、培養(yǎng)基問(wèn)題等）。
六、其他注意事項(xiàng)
定期對(duì)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行無(wú)菌操作培訓(xùn)，考核合格后方可上崗。
菌種復(fù)蘇與培養(yǎng)的全過(guò)程需做好記錄（如操作時(shí)間、操作人員、培養(yǎng)條件、觀察結(jié)果），便于污染溯源。
對(duì)高致病性菌種，需嚴(yán)格遵循生物安全等級(jí)要求，避免實(shí)驗(yàn)室感染和環(huán)境泄漏。
通過(guò)以上多環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制，可最大限度降低微生物凍干粉菌種培養(yǎng)過(guò)程中的污染風(fēng)險(xiǎn)，確保菌種的純度和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
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