菊糖生化管的使用前準(zhǔn)備與具體操作步驟及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-07-12 09:23:52
百歐博偉生物：菊糖生化管的使用方法需嚴(yán)格遵循微生物操作規(guī)范，核心是通過(guò)接種純培養(yǎng)的待檢菌，觀察其對(duì)菊糖的發(fā)酵能力（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣），從而輔助菌種鑒定。具體步驟如下：
一、使用前準(zhǔn)備
1、試劑檢查
確認(rèn)菊糖生化管在保質(zhì)期內(nèi)，包裝完好（無(wú)破損、無(wú)污染）。
觀察培養(yǎng)基狀態(tài)：液體培養(yǎng)基應(yīng)澄清，無(wú)渾濁、沉淀或顏色異常（正常為紅色，因含酚紅指示劑）；若有污染或變質(zhì)，禁止使用。
2、無(wú)菌操作準(zhǔn)備
超凈工作臺(tái)或生物安全柜消毒（紫外照射 30 分鐘，再用 75% 酒精擦拭臺(tái)面）。
準(zhǔn)備接種工具（如滅菌接種環(huán)、移液槍及無(wú)菌吸頭）、待檢菌純培養(yǎng)物（單菌落）、記號(hào)筆等。
二、具體操作步驟
1、標(biāo)記
用記號(hào)筆在菊糖生化管管壁標(biāo)注待檢菌名稱(chēng)、接種日期、操作者等信息，避免混淆。
2、接種
用滅菌接種環(huán)（經(jīng)火焰灼燒滅菌，冷卻后）挑取單個(gè)純菌落（確保無(wú)雜菌污染，這是結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵）。
將接種環(huán)伸入菊糖生化管的液體培養(yǎng)基中，輕輕攪動(dòng)數(shù)次，使菌均勻分散于培養(yǎng)基中；或用無(wú)菌移液槍吸取少量菌懸液（濃度適中）加入生化管，混勻。
若生化管內(nèi)有倒置小導(dǎo)管（用于檢測(cè)氣體），接種時(shí)避免觸碰導(dǎo)管，防止氣泡混入影響結(jié)果判斷。
3、培養(yǎng)
將接種后的菊糖生化管置于 35-37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，常規(guī)培養(yǎng) 18-24 小時(shí)；部分發(fā)酵能力較弱的菌種（如某些真菌）需延長(zhǎng)至 48 小時(shí)，但最長(zhǎng)不超過(guò) 72 小時(shí)（避免雜菌污染干擾結(jié)果）。
同時(shí)建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（如
肺炎鏈球菌，已知可發(fā)酵菊糖）和陰性對(duì)照（如甲型溶血性鏈球菌，已知不發(fā)酵菊糖），以驗(yàn)證試劑有效性。
4、結(jié)果觀察與判斷
培養(yǎng)結(jié)束后，取出生化管觀察顏色變化及是否有氣體產(chǎn)生：
陽(yáng)性結(jié)果：培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色（因發(fā)酵菊糖產(chǎn)酸，pH 下降，酚紅指示劑變色）；若有氣體產(chǎn)生，倒置小導(dǎo)管內(nèi)會(huì)出現(xiàn)氣泡（氣體占據(jù)導(dǎo)管空間，呈中空狀態(tài)）。
陰性結(jié)果：培養(yǎng)基保持紅色，無(wú)顏色變化，倒置小導(dǎo)管內(nèi)無(wú)氣泡（仍充滿液體）。
三、注意事項(xiàng)
1、純培養(yǎng)要求
必須使用單菌落接種，若待檢菌含雜菌，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性（如雜菌本身可發(fā)酵菊糖），嚴(yán)重影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
2、接種量控制
接種菌量不宜過(guò)多（避免培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)過(guò)?；虼x產(chǎn)物干擾），以單菌落少量接種為宜；菌懸液濃度過(guò)高可能導(dǎo)致培養(yǎng)基提前變色，需嚴(yán)格控制。
3、培養(yǎng)時(shí)間把控
培養(yǎng)不足 18 小時(shí)可能因發(fā)酵不完全導(dǎo)致假陰性；超過(guò) 72 小時(shí)可能因細(xì)菌代謝產(chǎn)物積累（如非菊糖發(fā)酵產(chǎn)生的酸）或雜菌污染，導(dǎo)致結(jié)果誤判。
4、安全操作
涉及病原微生物時(shí)，需在相應(yīng)等級(jí)的生物安全柜中操作，避免交叉污染或操作人員感染；使用后的廢棄試劑需按醫(yī)療廢棄物規(guī)范處理（如高壓滅菌后丟棄）。
通過(guò)以上步驟，可準(zhǔn)確判斷待檢菌對(duì)菊糖的發(fā)酵能力，為鏈球菌、隱球菌等微生物的鑒定提供關(guān)鍵生化依據(jù)。
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