真菌培養(yǎng)基的工作原理與使用方法及具體制備流程！
小楊 / 2025-07-09 10:10:09
真菌培養(yǎng)基是用于分離、培養(yǎng)、鑒定真菌的營養(yǎng)基質(zhì)，其設(shè)計核心是模擬真菌自然生長環(huán)境，提供必要的營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的理化條件。以下從原理和使用方法兩方面詳細說明：
一、真菌培養(yǎng)基的原理
真菌作為真核異養(yǎng)生物，無法自身合成有機物，需依賴外界環(huán)境獲取營養(yǎng)并在適宜條件下生長繁殖。真菌培養(yǎng)基的設(shè)計原理圍繞其代謝需求和環(huán)境適應(yīng)特點展開，具體包括以下核心要素：
1、營養(yǎng)物質(zhì)供給
真菌生長需滿足碳源、氮源、無機鹽、生長因子四大類營養(yǎng)需求：
碳源：真菌能量和生物合成的核心原料，常見如葡萄糖、蔗糖（速效碳源）、淀粉、纖維素（部分真菌可利用復(fù)雜碳源，如木霉能分解纖維素）。例如，酵母菌偏好葡萄糖，霉菌對蔗糖利用率較高。
氮源：用于合成蛋白質(zhì)、核酸等，以有機氮為主（如蛋白胨、酵母膏），部分真菌可利用無機氮。例如，致病性真菌常用蛋白胨作為氮源，更接近宿主環(huán)境。
無機鹽：參與酶活性調(diào)節(jié)、滲透壓維持，如鉀（KCl）、鎂（MgSO?）、鐵（FeSO?）等。例如，硫酸鎂可促進真菌細胞壁合成。
生長因子：多數(shù)真菌需維生素（如 B 族維生素）、氨基酸等，通常由酵母膏、麥芽汁等天然成分提供（無需單獨添加）。
2、理化條件適配
真菌對環(huán)境的要求與細菌差異顯著，培養(yǎng)基需優(yōu)化以下參數(shù)：
pH 值：真菌偏好酸性環(huán)境（pH 4.0-6.0），例如霉菌最適 pH 4.5-5.5，酵母菌 pH 5.0-6.0。若 pH 偏堿，會抑制菌絲生長。
滲透壓：部分真菌（如
酵母菌、高滲環(huán)境真菌）需較高滲透壓，培養(yǎng)基中添加蔗糖（20%-40%）可滿足需求（如高滲 PDA 用于耐旱真菌）。
透氣性：多數(shù)真菌為好氧菌，固體培養(yǎng)基的多孔結(jié)構(gòu)或液體培養(yǎng)基的搖床培養(yǎng)可保證氧氣供應(yīng)。
二、真菌培養(yǎng)基的使用方法
以最常用的固體培養(yǎng)基為例，步驟如下：
1、培養(yǎng)基選擇
根據(jù)目標(biāo)真菌類型選擇配方：
致病性真菌：Sabouraud 培養(yǎng)基（含葡萄糖、蛋白胨，pH 5.6），抑制細菌污染（酸性環(huán)境）。
特殊需求：察氏培養(yǎng)基（合成培養(yǎng)基，用于真菌分類，成分明確：磷酸二氫鉀、硫酸鎂等）。
2、制備流程
以 PDA（配方：馬鈴薯 200g、葡萄糖 20g、瓊脂 15-20g、水 1000mL）為例：
步驟 1：處理碳源原料
馬鈴薯去皮切塊（2cm 見方），加水 1000mL 煮沸 30 分鐘（至軟爛），用紗布過濾取濾液（補足水分至 1000mL）。
步驟 2：溶解與混合
濾液中加入葡萄糖和瓊脂，加熱攪拌至完全溶解（瓊脂需煮沸溶解）。
步驟 3：調(diào)節(jié) pH
用 1mol/L HCl 或 NaOH 將 pH 調(diào)至 5.0-5.5（用 pH 計或精密試紙檢測）。
步驟 4：分裝與滅菌
將培養(yǎng)基分裝至錐形瓶（占體積 1/3）或試管，加棉塞 / 硅膠塞，包扎后高壓蒸汽滅菌（121℃，20 分鐘）。若含不耐熱成分，滅菌后冷卻至 50-60℃時無菌添加（用濾膜過濾除菌）。
3、滅菌后處理
倒平板：滅菌后取出培養(yǎng)基，冷卻至 50-60℃（不燙手），在超凈臺內(nèi)倒入無菌培養(yǎng)皿（每皿約 15-20mL），水平放置冷卻凝固（約 30 分鐘）。
斜面制備：試管培養(yǎng)基滅菌后傾斜放置（成 45° 角），冷卻后形成斜面（用于菌種保存）。
4、接種與培養(yǎng)
接種：無菌操作（超凈臺內(nèi)），用接種環(huán)取真菌孢子或菌絲，在平板上劃線（分離單菌落）或點種（觀察生長）。
培養(yǎng)條件：
溫度：多數(shù)真菌 25-28℃（如霉菌），致病性真菌 37℃（模擬人體環(huán)境）。
濕度：培養(yǎng)箱內(nèi)放盛水燒杯，保持濕度 80%-90%（防止培養(yǎng)基干裂）。
時間：霉菌 3-7 天，酵母菌 2-3 天，慢生長真菌（如皮膚癬菌）需 1-2 周。
5、觀察與記錄
菌落形態(tài)：顏色（如青霉呈綠色，曲霉呈黃色）、質(zhì)地（絨毛狀、粉末狀）、邊緣（整齊或波狀）。
微觀特征：挑取菌絲或孢子，制片后顯微鏡觀察（如曲霉的頂囊結(jié)構(gòu)、青霉的帚狀枝）。
三、注意事項
滅菌徹底：未滅菌的培養(yǎng)基易污染細菌或雜菌，導(dǎo)致真菌生長受抑。
pH 準(zhǔn)確：酸性不足會抑制真菌，可在滅菌后復(fù)測（滅菌可能導(dǎo)致 pH 輕微變化）。
無菌操作：接種工具需灼燒滅菌，避免手部接觸培養(yǎng)基表面。
配方調(diào)整：若真菌生長緩慢，可增加碳源 / 氮源濃度（如葡萄糖增至 30g/L）。
通過以上原理和方法，可實現(xiàn)真菌的高效培養(yǎng)與分離，滿足科研、臨床或工業(yè)需求。
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