細胞培養(yǎng)開始前的準備工作
微生物菌種查詢網(wǎng) / 2015-03-20 08:22:10
細胞培養(yǎng)開始前的準備工作
一、掌握相關(guān)知識：
1.學(xué)習(xí)細胞培養(yǎng)知識。
了解相關(guān)概念、方法，記住操作過程，觀摩、參與實際操作。參考書《動物細胞培養(yǎng)-基本技術(shù)指南》（科學(xué)出版社）。
2.掌握無菌技術(shù)。
高壓消毒實驗用品：操作臺上不是一次性的物品均需做滅菌處理，無法高壓的物品應(yīng)使用75%酒精消毒。
消毒操作間和操作臺：使用75%酒精擦拭無菌間的墻面、地面，操作臺的臺面，孵箱，離心機等。操作前須用紫外線照射無菌間和操作臺30分鐘消毒。入無菌間須穿隔離服，戴手套、口罩、帽子。用75%酒精洗去手套上的滑石粉。
無菌操作：操作時應(yīng)盡量接近酒精燈；拿取吸管時，避免接觸其使用端；不要在開口器皿的上方操作；吸取不同液體應(yīng)更換吸管。不能碰瓶口。萬一碰到，更換吸管。
二、細胞培養(yǎng)用品的準備：
1無菌服裝：包括消毒隔離服（有條件的實驗室）或?qū)Ｓ霉ぷ鞣ㄈ绨状蠊樱?、無菌手套、無菌帽和口罩。除隔離服外，其他物品最好為一次性使用。
2.操作臺：有條件的實驗室可裝備超凈培養(yǎng)間，超凈工作臺和生物安全柜也可。所有物品除一次性物品外均需高壓滅菌。有酒精燈及95%酒精、吸管或槍（槍頭）、洗耳球、或電動移液器、小試管及試管架、培養(yǎng)瓶架、離心管、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶、計數(shù)板、廢液缸。
3.儀器設(shè)備：相差顯微鏡、離心機、冰箱、水浴鍋、無菌車及架子、廢物桶、marker筆、滅菌擦手紙、75%酒精噴壺。
4.培養(yǎng)用液：PBS或D-hanks、胰酶等消化液（一般為0.05%或0.25%）、培養(yǎng)基（常用的有DMEM、R1640、MEN-EBSS、MEN-NEAA、F12、L15等）、血清（胎牛、小牛、馬等）、生長因子、藥物。培養(yǎng)用液需提前向公司訂購，或咨詢聯(lián)系電話（010-51291224）。這些培養(yǎng)用液都有商業(yè)供應(yīng)，不建議購買粉劑自己制備液體。
5.其他實驗相關(guān)用品。一些非常規(guī)特殊用途的添加成分或?qū)嶒炗闷?，須向公司訂購，因寄送有一定滯后性，建議在訂細胞之前購買。
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