你知道如何選擇適合的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)腸道巴氏桿菌嗎？
小楊 / 2025-07-12 09:10:58
百歐博偉生物：選擇適合培養(yǎng)
腸道巴氏桿菌的培養(yǎng)基，需結(jié)合其生物學(xué)特性（如營(yíng)養(yǎng)需求、代謝特點(diǎn)）和培養(yǎng)目的（如分離、純化、鑒定），以下是具體的選擇指南和推薦方案：
一、腸道巴氏桿菌的核心培養(yǎng)需求
腸道巴氏桿菌屬于革蘭氏陰性兼性厭氧菌，其生長(zhǎng)依賴以下條件：
營(yíng)養(yǎng)要求較高：需富含蛋白質(zhì)、氨基酸和生長(zhǎng)因子（如血液、血清中的營(yíng)養(yǎng)成分），普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如
營(yíng)養(yǎng)瓊脂）難以滿足其生長(zhǎng)需求。
氧氣耐受性：可在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)，但部分菌株在微需氧或厭氧條件下生長(zhǎng)更佳。
生化特性：氧化酶陽(yáng)性、觸酶陽(yáng)性，不發(fā)酵乳糖（多數(shù)菌株），可作為鑒別依據(jù)。
二、推薦培養(yǎng)基類型及適用場(chǎng)景
1、基礎(chǔ)增菌培養(yǎng)基：用于樣本中少量巴氏桿菌的富集
推薦：含血清的肉湯培養(yǎng)基
配方：普通肉湯（蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉）中添加 5%-10% 滅活動(dòng)物血清（如牛血清、馬血清）或全血。
原理：血清提供生長(zhǎng)因子（如維生素、氨基酸），促進(jìn)巴氏桿菌增殖，尤其適用于糞便、腸道內(nèi)容物等含雜菌較多的樣本，可先通過(guò)增菌提高檢出率。
培養(yǎng)條件：35-37℃，需氧或 5% CO?環(huán)境，培養(yǎng) 18-24 小時(shí)。
2、分離純化培養(yǎng)基：用于從混合菌中分離單個(gè)菌落
配方：基礎(chǔ)瓊脂 + 5%-10% 脫纖維羊血或兔血。
特點(diǎn)：腸道巴氏桿菌在血瓊脂上生長(zhǎng)良好，形成圓形、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊的小菌落（直徑 1-2mm），多數(shù)菌株不溶血（少數(shù)可能出現(xiàn) α- 溶血），可與溶血的致病菌（如鏈球菌）區(qū)分。
優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)便，適合初步分離，且能通過(guò)溶血特性初步鑒別。
推薦 2：
巧克力瓊脂（Chocolate Agar）
配方：血瓊脂經(jīng) 80-90℃加熱使血紅蛋白釋放，形成褐色培養(yǎng)基。
特點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)更豐富（加熱后的血液成分更易被利用），適合營(yíng)養(yǎng)需求更高的巴氏桿菌菌株，尤其適用于樣本中菌量極少的情況。
3、選擇性培養(yǎng)基：用于抑制雜菌，提高分離效率
腸道巴氏桿菌對(duì)某些抗生素敏感，需謹(jǐn)慎選擇選擇性培養(yǎng)基（避免抑制目標(biāo)菌），推薦：
改良麥康凱瓊脂（不含結(jié)晶紫或低濃度結(jié)晶紫）
原理：普通麥康凱瓊脂含結(jié)晶紫和膽鹽，可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，但高濃度結(jié)晶紫可能抑制巴氏桿菌。改良后降低結(jié)晶紫濃度，既保留對(duì)雜菌的抑制，又允許巴氏桿菌生長(zhǎng)（因巴氏桿菌不發(fā)酵乳糖，菌落呈無(wú)色透明）。
適用場(chǎng)景：樣本中革蘭氏陰性雜菌（如
大腸桿菌）較多時(shí)，可提高分離純度。
哥倫比亞血瓊脂 + 抗生素添加劑（如萬(wàn)古霉素、桿菌肽）
原理：添加針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素（萬(wàn)古霉素等），抑制腸道中的葡萄球菌、鏈球菌等，而巴氏桿菌對(duì)其不敏感，可選擇性生長(zhǎng)。
4、鑒別培養(yǎng)基：用于生化特性鑒定
結(jié)合腸道巴氏桿菌的生化反應(yīng)（氧化酶陽(yáng)性、不發(fā)酵乳糖等），可選用：
氧化酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：挑取菌落與氧化酶試劑反應(yīng)，陽(yáng)性（紫色）可初步確認(rèn)（與
沙門氏菌、
大腸桿菌等氧化酶陰性菌區(qū)分）。
糖發(fā)酵管：檢測(cè)對(duì)葡萄糖、乳糖的發(fā)酵能力（多數(shù)巴氏桿菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖），與發(fā)酵乳糖的大腸桿菌區(qū)分。
三、選擇培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)
優(yōu)先滿足營(yíng)養(yǎng)需求：無(wú)論選擇哪種培養(yǎng)基，必須保證含血清或血液成分，否則腸道巴氏桿菌可能不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)微弱。
避免過(guò)度抑制：選擇性培養(yǎng)基需先驗(yàn)證，確保目標(biāo)菌能生長(zhǎng)，避免因抗生素濃度過(guò)高導(dǎo)致漏檢。
結(jié)合樣本類型：
若樣本為新鮮糞便（雜菌多）：先增菌（血清肉湯），再接種血瓊脂或改良選擇性培養(yǎng)基。
若樣本為純培養(yǎng)物（如菌落純化）：直接接種血瓊脂或巧克力瓊脂即可。
參考培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基需配合適宜的溫度（35-37℃）和氣體環(huán)境（需氧或微需氧），否則即使培養(yǎng)基合適，也可能影響生長(zhǎng)。
四、總結(jié)
培養(yǎng)
腸道巴氏桿菌的核心是提供富含血清/血液的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，首選血瓊脂平板（分離純化）和含血清的肉湯（增菌）；若需抑制雜菌，可選用改良的低選擇性培養(yǎng)基（如低結(jié)晶紫麥康凱瓊脂）。同時(shí)，需結(jié)合生化試驗(yàn)（如氧化酶陽(yáng)性）進(jìn)一步確認(rèn)，確保與其他腸道菌區(qū)分。
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