雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基的使用方法與培養(yǎng)現象及結果判讀！
小楊 / 2025-07-07 09:12:02
雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管是用于水中或某些食品中
糞腸球菌和
屎腸球菌（統(tǒng)稱糞鏈球菌群）推定性檢測的選擇性增菌培養(yǎng)基。其使用方法和觀察現象如下：
一、使用方法 (Standard Method)
1、樣品準備：
水樣：根據預計污染程度，選擇合適體積的水樣（如100mL、10mL、1mL）或適當稀釋度。
食品樣：需按標準方法（如ISO或國標）進行均質、稀釋。
2、接種：
關鍵點：“雙料”意味著培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分濃度是單料的兩倍，因此用于接種較大體積的樣品。
用無菌吸管吸取10mL水樣（或食品樣品的10mL稀釋液）直接加入到一支雙料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管中。
注意：如果接種量小于10mL（如1mL），則應使用單料腸球菌肉湯培養(yǎng)基管。雙料管專門為接種10mL樣品設計。
3、培養(yǎng)：
將接種好的培養(yǎng)基管放入恒溫培養(yǎng)箱。
培養(yǎng)溫度：36 ± 1°C
培養(yǎng)時間：48 ± 2小時
4、觀察：
在培養(yǎng)結束后（通常24小時和48小時各觀察一次），取出培養(yǎng)基管。
肉眼觀察培養(yǎng)基的渾濁度變化和產氣情況（觀察杜氏小管）。
二、現象與結果判讀
1、陽性結果 (推定陽性 - Presumptive Positive)：
渾濁度：培養(yǎng)基出現明顯的渾濁（與未接種的空白管對比）。
產氣：杜氏小管頂端有氣泡聚集（無論大小，即使是很小的氣泡也算）。氣泡的產生是由于某些腸球菌能發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖類產氣。
判定：只要在培養(yǎng)期內（通常是48小時）觀察到渾濁并伴有任何產氣現象，即可判定為糞鏈球菌群推定陽性。這是初步指示樣品中可能存在目標菌。
2、陰性結果 (推定陰性 - Presumptive Negative)：
渾濁度：培養(yǎng)基保持澄清或僅有極其輕微、不顯著的渾濁（與空白管無明顯區(qū)別）。
產氣：杜氏小管內完全沒有氣泡。
判定：培養(yǎng)48小時后未觀察到渾濁和產氣，判定為糞鏈球菌群推定陰性。
三、重要注意事項
1、推定性試驗：雙料腸球菌肉湯的陽性結果僅表明樣品中可能存在糞鏈球菌群。它不能作為最終確認。陽性管必須進行后續(xù)的確證試驗（如轉移到膽汁七葉苷瓊脂/BEA斜面或KF鏈球菌瓊脂上培養(yǎng)，并進行革蘭氏染色、過氧化氫酶試驗、吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗等生化鑒定）才能最終報告檢出糞腸球菌或屎腸球菌。
2、選擇性與差異性：
疊氮化鈉：是主要的選擇性抑制劑，能抑制大多數革蘭氏陰性菌和部分革蘭氏陽性菌的生長，而腸球菌對其有相對耐受性。
TTC (氯化三苯基四氮唑)：常作為指示劑加入。腸球菌生長時還原TTC，使菌落或培養(yǎng)基呈現紅色或粉紅色（尤其是在確證培養(yǎng)基如BEA上更明顯）。但在肉湯管中，渾濁本身是主要指標，顏色變化可能不如在固體培養(yǎng)基上顯著。
3、無菌操作：整個接種過程必須在無菌條件下進行，避免雜菌污染導致假陽性。
4、溫度控制：嚴格控制培養(yǎng)溫度（36°C）對結果準確性至關重要。
5、觀察時機：建議在24小時和48小時分別觀察記錄一次。有些陽性可能在24小時就顯現，有些則要到48小時。最終判讀以48小時結果為準。
6、標準依據：具體操作步驟（如接種量、培養(yǎng)時間、確證方法）應嚴格遵循你所執(zhí)行的檢測標準（如《GB/T 8538-2022 飲用天然礦泉水檢驗方法》、《GB 4789.6 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗》中相關的腸球菌檢測部分，或ISO 7899-2等國際標準）。
四、總結：
用法：接種 10mL 樣品液到雙料腸球菌肉湯管中，36°C 培養(yǎng)48小時。
陽性現象：渾濁 + 杜氏小管內有氣泡（推定存在糞鏈球菌群）。
陰性現象：澄清/輕微渾濁（無顯著變化） + 杜氏小管內無氣泡（推定無糞鏈球菌群）。
關鍵下一步：所有陽性管必須進行確證試驗才能報告最終結果。
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