實(shí)驗(yàn)室血清的質(zhì)檢要點(diǎn)及使用難點(diǎn)總結(jié)與解決方案！
小楊 / 2025-05-21 10:04:29
百歐博偉生物：以下是關(guān)于實(shí)驗(yàn)室血清的質(zhì)檢要點(diǎn)、在不同細(xì)胞系中的驗(yàn)證方法及使用難點(diǎn)的總結(jié)，結(jié)合了多個(gè)來源的信息：
一、血清的質(zhì)檢要點(diǎn)
1、理化性質(zhì)檢測(cè)
顏色與澄清度：優(yōu)質(zhì)血清通常呈淡黃色或微紅色，澄清度較高。胎牛血清因蛋白和脂類含量低，質(zhì)地較稀薄，而新生牛血清更粘稠。
沉淀物分析：血清中常見纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物，需通過離心（400g，5分鐘）去除，避免過濾導(dǎo)致濾膜堵塞。
2、微生物與安全性檢測(cè)
無菌檢測(cè)：需進(jìn)行支原體、病毒及細(xì)菌污染檢測(cè)，確保無微生物污染。
內(nèi)毒素與補(bǔ)體活性：內(nèi)毒素水平需低于閾值（如<10 EU/mL），補(bǔ)體活性可通過熱滅活（56℃, 30分鐘）評(píng)估，但非必要情況下不建議滅活。
3、功能性驗(yàn)證
促生長能力測(cè)試：通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)評(píng)估血清對(duì)特定細(xì)胞系的促生長效果，例如3T3細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn)。
貼附與遷移能力：如劃痕實(shí)驗(yàn)（AGS細(xì)胞）和遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證血清對(duì)細(xì)胞貼壁和運(yùn)動(dòng)的影響。
二、血清在不同細(xì)胞系中的驗(yàn)證
1、腫瘤細(xì)胞系
AGS細(xì)胞（
胃癌細(xì)胞）：通過劃痕實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證血清對(duì)細(xì)胞遷移的抑制作用，需使用含10% FBS的Ham's F-12培養(yǎng)基。
PC-3細(xì)胞（
前列腺癌細(xì)胞）：實(shí)驗(yàn)顯示雄激素受體抑制遷移，血清濃度需穩(wěn)定以維持實(shí)驗(yàn)一致性。
2、神經(jīng)細(xì)胞系
SH-SY5Y細(xì)胞（
神經(jīng)母細(xì)胞瘤）：使用含15% FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基，驗(yàn)證神經(jīng)突觸延伸功能。
3、免疫細(xì)胞系
THP-1細(xì)胞（
單核細(xì)胞）：趨化實(shí)驗(yàn)中，含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基支持細(xì)胞定向遷移。
4、干細(xì)胞與敏感細(xì)胞
干細(xì)胞（如iPSC）需使用胎牛血清（FBS），因其抗體含量低且生長因子豐富，需通過標(biāo)志物驗(yàn)證未分化狀態(tài)。
三、血清使用的難點(diǎn)與解決方案
1、保存與解凍
保存條件：長期保存需-80℃，常用分裝至-20℃；避免反復(fù)凍融導(dǎo)致沉淀增加。
解凍方法：需從-20℃轉(zhuǎn)移至4℃緩慢解凍，避免直接置于37℃或劇烈搖晃，以減少絮狀沉淀。
2、沉淀物處理
沉淀物通常為纖維蛋白或磷酸鈣，不影響細(xì)胞生長，但需離心去除（400g, 5分鐘），不可過濾。
3、血清替換與馴化
更換血清品牌時(shí)需逐步過渡，初始比例新血清:原血清=1:3，逐步提高至100%，并監(jiān)測(cè)細(xì)胞狀態(tài)。
4、熱滅活的爭議
熱滅活可能降低血清活性，僅在特定實(shí)驗(yàn)（如免疫學(xué)）需要，常規(guī)培養(yǎng)不建議使用。
5、批次差異與質(zhì)量控制
不同批次血清存在生長因子含量差異，需通過預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選適配批次，必要時(shí)進(jìn)行功能性驗(yàn)證。
四、總結(jié)
血清的質(zhì)檢需綜合理化、微生物及功能指標(biāo)，驗(yàn)證時(shí)需針對(duì)不同細(xì)胞系設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)（如增殖、遷移）。使用難點(diǎn)主要集中在保存、沉淀處理和批次差異，需嚴(yán)格操作流程并逐步優(yōu)化條件。
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