實驗室真菌污染的常見來源與識別方法及處理與預(yù)防策略！
小楊 / 2025-07-25 09:52:07
百歐博偉生物：實驗室中真菌污染是常見的微生物污染問題，不僅會干擾實驗結(jié)果（如影響細胞培養(yǎng)、微生物分離純化、酶活性測定等），還可能對實驗人員健康造成潛在威脅（如引發(fā)過敏、呼吸道不適）。以下從污染的常見來源、識別方法、處理措施及預(yù)防策略四個方面詳細說明，幫助有效應(yīng)對實驗室真菌污染。
一、真菌污染的常見來源
真菌污染多通過空氣、實驗材料、操作工具或人員帶入，常見源頭包括：
空氣傳播：真菌孢子（如
曲霉、
青霉、
毛霉的孢子）可通過通風系統(tǒng)、門窗開合進入實驗室，尤其在潮濕環(huán)境（如雨季、空調(diào)冷凝水附近）易滋生。
1、實驗材料污染：
未徹底滅菌的培養(yǎng)基、試劑（如含天然成分的培養(yǎng)基，如馬鈴薯葡萄糖瓊脂 PDA、血清等）；
外源性樣品（如土壤、植物組織、水體樣本）本身攜帶真菌孢子；
細胞或微生物菌種保藏不當，被真菌污染后擴散。
2、操作與環(huán)境問題：
超凈臺、生物安全柜過濾器失效（HEPA 過濾器堵塞或破損），導致空氣凈化不足；
實驗臺面、培養(yǎng)箱、冰箱等未定期消毒，殘留真菌孢子；
實驗人員操作不規(guī)范（如未戴口罩、操作時敞口放置培養(yǎng)皿、手接觸無菌材料）。
二、真菌污染的識別方法
真菌污染在不同實驗場景中表現(xiàn)不同，可通過外觀、氣味或顯微鏡觀察判斷：
1、微生物培養(yǎng) / 培養(yǎng)基污染：
肉眼可見：培養(yǎng)基表面或內(nèi)部出現(xiàn)白色、綠色、黑色、黃色等絨毛狀、絮狀或粉末狀菌落（如
青霉呈綠色絨毛，
曲霉呈黑色顆粒狀，
毛霉呈白色棉絮狀），菌落邊緣多不規(guī)則，且隨時間快速擴散。
氣味：部分真菌污染會產(chǎn)生霉味或土腥味。
2、細胞培養(yǎng)污染：
培養(yǎng)液通常不渾濁（區(qū)別于細菌污染的渾濁），但鏡下可見：
細胞間隙或培養(yǎng)液中出現(xiàn)絲狀、樹枝狀菌絲（如
毛霉），或圓形 / 橢圓形孢子（如酵母菌，需注意與細胞碎片區(qū)分）；
細胞生長受抑制（增殖減慢、形態(tài)變圓、脫落）。
3、環(huán)境表面污染：
實驗臺、培養(yǎng)箱內(nèi)壁、冰箱角落等潮濕處出現(xiàn)霉斑（黑色、綠色點狀或片狀污漬），尤其在長時間未清潔的縫隙中易發(fā)現(xiàn)。
三、真菌污染的處理措施
發(fā)現(xiàn)污染后需立即處理，避免擴散，根據(jù)“污染對象”分類處理：
（一）已污染的實驗材料 / 樣品：徹底滅活，禁止隨意丟棄
1、微生物培養(yǎng)物 / 培養(yǎng)基：
若為非致病性真菌（如實驗室常見的
曲霉、
青霉），將污染樣品連同容器一起放入高壓蒸汽滅菌鍋（121℃、103kPa、20-30 分鐘）徹底滅菌后，再按實驗室廢棄物處理（放入專用醫(yī)療垃圾袋）。
若可能涉及致病性真菌（如新型隱球菌、組織胞漿菌，需結(jié)合樣品來源判斷），需在生物安全柜內(nèi)操作，用含 5% 次氯酸鈉的消毒液浸泡容器表面后，再滅菌處理，避免孢子擴散。
2、細胞培養(yǎng)污染：
立即丟棄污染的細胞培養(yǎng)液（倒入含消毒液的專用廢液桶），培養(yǎng)瓶 / 皿用 75% 酒精擦拭外表面后，放入高壓滅菌袋滅菌；
若需保留細胞系，需確認污染程度：輕度污染可嘗試用抗真菌藥物處理，但成功率低，且可能影響細胞活性，建議優(yōu)先丟棄并重新復蘇備份細胞。
3、污染的工具 / 容器：
玻璃器皿（培養(yǎng)皿、試管）：先浸泡在 5% 次氯酸鈉或 0.2% 過氧乙酸溶液中 1-2 小時，再清洗后高壓滅菌；
塑料耗材（移液槍頭、離心管）：直接裝入滅菌袋，高壓滅菌后丟棄。
（二）污染的實驗環(huán)境 / 設(shè)備：針對性消毒，殺滅孢子
需根據(jù)污染區(qū)域選擇合適的消毒方式，重點殺滅真菌孢子（孢子對常規(guī)消毒有一定抵抗力，需用高效消毒劑）：
小范圍表面消毒（實驗臺、培養(yǎng)箱、超凈臺內(nèi)部）：
第一步：清除可見污染物：用蘸有 75% 酒精的紙巾擦掉表面霉斑（避免干擦，防止孢子飛揚），若霉斑較厚，可先用含 5% 次氯酸鈉的消毒液濕潤后再擦拭（次氯酸鈉對孢子殺滅效果強）。
第二步：深度消毒：
用含氯消毒劑（如 500-1000mg/L 次氯酸鈉溶液）、過氧乙酸（0.2%-0.5%）或季銨鹽類消毒劑擦拭表面，作用 30 分鐘后用無菌水或 75% 酒精二次清潔（避免殘留消毒劑影響后續(xù)實驗）；
超凈臺 / 生物安全柜：開啟紫外燈照射 30-60 分鐘（紫外可破壞真菌孢子的 DNA），同時更換內(nèi)部濾網(wǎng)（若污染嚴重）。
培養(yǎng)箱 / 冰箱污染：
先清空內(nèi)部物品，取出隔板，用 5% 次氯酸鈉擦拭內(nèi)壁、隔板及角落，靜置 30 分鐘后用清水擦凈；
放入含氯消毒片或防霉盒，并保持內(nèi)部干燥（可放一盆生石灰吸濕）；
培養(yǎng)箱可設(shè)定 40-50℃烘干 2-4 小時（利用高溫殺滅殘留孢子）。
空氣污染處理：
若局部污染（如超凈臺內(nèi)），關(guān)閉通風后用甲醛熏蒸（需按比例配置，如 10ml/m³ 甲醛溶液，密閉 6-12 小時，注意人員防護），或用過氧化氫霧化消毒（更安全，無殘留）；
實驗室整體通風：開啟新風系統(tǒng)，關(guān)閉與外界潮濕環(huán)境的連通，必要時在空氣入口放置空氣凈化器（帶 HEPA 濾網(wǎng)）。
四、真菌污染的預(yù)防策略
真菌污染“防大于治”，日常需通過規(guī)范操作和環(huán)境管理減少風險：
（一）實驗操作規(guī)范
1、無菌操作核心：
微生物 / 細胞培養(yǎng)時，在超凈臺或生物安全柜內(nèi)操作，戴口罩、手套，必要時戴發(fā)帽（避免頭發(fā)上的孢子掉落）；
培養(yǎng)基、試劑滅菌后需抽樣驗證（如 37℃培養(yǎng) 24-48 小時，觀察是否長菌），天然成分培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用；
外源性樣品（如土壤、植物）處理時，先通過梯度稀釋、高溫處理（如 60℃加熱 30 分鐘殺滅部分真菌孢子）或選擇性培養(yǎng)基（如加抗生素抑制真菌）降低污染風險。
2、工具與耗材管理：
移液槍、接種環(huán)等工具需徹底滅菌（接種環(huán)灼燒滅菌，移液槍頭用高壓蒸汽滅菌）；
無菌容器（培養(yǎng)皿、離心管）開封后需在超凈臺內(nèi)使用，避免敞口暴露在空氣中超過 10 分鐘。
（二）環(huán)境與設(shè)備維護
1、定期清潔消毒：
實驗臺面：每日實驗后用 75% 酒精擦拭，每周用含氯消毒劑徹底消毒 1 次；
培養(yǎng)箱、冰箱：每周清空內(nèi)部，用 75% 酒精擦拭，每月用含氯消毒劑消毒 1 次，避免冷凝水堆積（培養(yǎng)箱內(nèi)放吸水紙，及時更換）；
超凈臺 / 生物安全柜：每次使用前后用 75% 酒精擦拭臺面，每月檢查 HEPA 過濾器風壓（低于標準時及時更換），每 3 個月請專業(yè)人員維護。
2、控制環(huán)境溫濕度：
實驗室濕度保持在 40%-60%（潮濕地區(qū)可使用除濕機），避免在水槽、空調(diào)附近放置培養(yǎng)物；
通風系統(tǒng)定期清潔（如濾網(wǎng)每季度清洗 1 次），雨季關(guān)閉朝陰面窗戶，減少外界孢子進入。
（三）應(yīng)急與監(jiān)測
儲備常用消毒用品（75% 酒精、次氯酸鈉、過氧乙酸、紫外燈），明確存放位置和使用方法；
對長期培養(yǎng)的細胞或微生物，定期觀察（如每天鏡檢細胞，微生物培養(yǎng)每天查看菌落形態(tài)），發(fā)現(xiàn)污染立即隔離處理，避免交叉污染；
若實驗人員出現(xiàn)持續(xù)咳嗽、打噴嚏、皮膚過敏等癥狀，需排查是否因真菌孢子過敏，必要時檢測實驗室空氣真菌濃度（通過空氣采樣培養(yǎng)）。
五、總結(jié)
實驗室真菌污染的核心應(yīng)對原則是“快速識別、徹底滅活、源頭預(yù)防”。關(guān)鍵在于減少孢子的引入（規(guī)范操作 + 環(huán)境干燥）和及時處理污染（針對真菌孢子選擇高效消毒劑，如含氯消毒劑、紫外）。對于科研實驗，污染后的材料需果斷丟棄（避免污染擴散或影響結(jié)果），同時通過定期維護設(shè)備和清潔環(huán)境，從根本上降低污染概率。
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