食品接觸面微生物的主要檢驗方法及關鍵注意事項！
小楊 / 2025-06-26 10:01:24
百歐博偉生物：針對食品接觸面的微生物檢驗，是確保食品安全、預防食源性疾病的關鍵環(huán)節(jié)。以下是詳細的檢驗方法及重要注意事項：
一、主要檢驗方法（通常遵循標準如ISO 18593、GB 4789等）
1、涂抹法（表面拭子法）：
原理：用無菌拭子（棉簽、海綿拭子等）蘸取無菌稀釋液或中和緩沖液，在規(guī)定的面積內（通常10cm x 10cm = 100cm²）用力、均勻、系統(tǒng)地擦拭表面，將微生物轉移到拭子上。
步驟：
標記采樣區(qū)域（可使用無菌模板）。
打開無菌拭子包裝，用拭子頭蘸取適量無菌稀釋液/中和液（避免過飽和）。
在標記區(qū)域內，沿水平、垂直、對角線方向用力擦拭，同時旋轉拭子確保所有面都接觸表面。
將拭子頭剪斷或直接放入裝有定量的無菌稀釋液/中和液的試管中。
充分振蕩試管，使微生物洗脫到液體中，形成初始樣品液。
根據(jù)預期污染程度，對樣品液進行適當倍數(shù)的系列稀釋。
選擇合適稀釋度的樣品液，傾注平板或涂布平板進行培養(yǎng)計數(shù)。
2、接觸平板法：
原理：使用特制的、培養(yǎng)基凸出于皿蓋的瓊脂平板，直接按壓在平整的待測表面上，使瓊脂與表面充分接觸，轉移微生物。
步驟：
打開皿蓋，將凸起的瓊脂面直接、均勻、輕柔地按壓在待測表面（避免滑動）。
保持按壓幾秒鐘（通常5-10秒）。
蓋回皿蓋。
將平板倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中按標準條件培養(yǎng)。
計數(shù)瓊脂表面形成的菌落（CFU/plate）。結果通常表示為每個平板上的菌落數(shù)，或換算為CFU/cm²（需知道平板接觸面積）。
3、表面沖洗法：
原理：適用于難以擦拭或接觸的管道內壁、容器內部等。用定量的無菌稀釋液/中和液沖洗整個內表面，收集沖洗液作為樣品。
步驟：
將一定量（如100ml）無菌稀釋液/中和液注入待測管道或容器。
密封開口，劇烈振蕩或翻轉沖洗內壁規(guī)定時間（如1分鐘）。
收集全部沖洗液。
根據(jù)情況可直接傾注平板或進行適當稀釋后再傾注/涂布培養(yǎng)計數(shù)。
二、關鍵注意事項
1、無菌操作：
采樣人員必須經過無菌操作培訓，穿戴無菌手套、口罩、帽子、工作服。
采樣工具（拭子、試管、剪刀、鑷子、RODAC平板、稀釋液等）必須確保無菌并在使用前檢查包裝完整性。
打開包裝、蘸取液體、接觸樣品表面、放入容器等步驟，必須防止環(huán)境微生物的污染。操作過程應迅速、規(guī)范。
2、采樣點選擇：
代表性：根據(jù)風險評估，選擇關鍵控制點（CCP）后、清潔消毒后、生產過程中易污染或難清潔的部位（如設備縫隙、刀具、砧板、傳送帶接頭、灌裝口、員工手套等）。
隨機性：避免每次都采相同的點，以反映整體衛(wèi)生狀況。
面積與數(shù)量：明確采樣面積，并確保每次采樣面積一致。根據(jù)監(jiān)控計劃確定采樣頻率和點數(shù)。
3、中和劑使用：
至關重要！清潔消毒后采樣，殘留的消毒劑（如含氯消毒劑、季銨鹽、過氧化物等）會抑制微生物生長，導致假陰性結果。
稀釋液/沖洗液中必須含有能有效中和殘留消毒劑的成分（如硫代硫酸鈉中和氯，卵磷脂吐溫80中和季銨鹽和酚類，過氧化氫酶中和過氧化物）。
選擇標準化的商業(yè)無菌中和緩沖液，并驗證其有效性。
4、采樣技術：
涂抹法：確保用力均勻，覆蓋整個規(guī)定面積，旋轉拭子，保證有效轉移微生物。避免拭子過干或過濕。
接觸平板法：按壓時用力均勻、輕柔、避免滑動，確保瓊脂與表面完全接觸。只適用于非常平整光滑的表面。
及時處理：采樣后應盡快將樣品（拭子試管、RODAC平板）放入冷藏箱（0-4°C）并在規(guī)定時間內（通常≤24小時）送達實驗室處理，防止微生物死亡或繁殖。
5、樣品標識與記錄：
清晰標記每個樣品（唯一編號、采樣日期時間、采樣點位置/名稱、采樣人）。
詳細記錄采樣環(huán)境信息（如采樣時生產狀態(tài)、上次清潔消毒時間、使用的消毒劑等）。
6、實驗室分析：
培養(yǎng)基質量控制：使用符合標準的培養(yǎng)基，定期進行質控（無菌性、生長性檢查）。
稀釋與接種：嚴格按標準進行樣品稀釋和接種操作（傾注法溫度控制、涂布均勻性）。
培養(yǎng)條件：嚴格按目標微生物要求控制培養(yǎng)溫度和時間（如
菌落總數(shù)PCA 30-35°C 48±2h；
大腸菌群VRBA 36±1°C 18-24h）。
菌落計數(shù)與報告：按標準方法進行菌落計數(shù)（選擇合適稀釋度的平板），報告結果（如CFU/cm²， CFU/拭子， CFU/平板）。注意區(qū)分目標菌落和非目標菌落。
7、結果解讀與行動：
制定明確的微生物限量標準（基于法規(guī)、行業(yè)指南、企業(yè)內控標準）。
建立超標結果（OOS）的調查程序：立即復核實驗過程、檢查采樣記錄、復測該點及周邊區(qū)域、評估清潔消毒程序有效性、必要時采取糾正措施。
進行趨勢分析，識別衛(wèi)生管理的薄弱環(huán)節(jié)，持續(xù)改進。
三、補充重要注意事項
人員培訓：所有參與采樣和實驗室分析的人員必須接受充分的培訓并通過考核。
環(huán)境控制：實驗室環(huán)境應符合微生物檢測要求，避免交叉污染。采樣時也應盡量減少對生產環(huán)境的干擾。
方法驗證：企業(yè)采用的檢驗方法應進行適用性驗證。
采樣計劃：制定科學、系統(tǒng)的環(huán)境監(jiān)控計劃，明確采樣點、頻率、方法、目標微生物、可接受標準、職責分工等。
總結：
食品接觸面微生物檢驗是保障食品安全的重要工具，但其結果的準確性和可靠性高度依賴于嚴格的無菌操作、正確的采樣技術（尤其是中和劑的使用）、規(guī)范的實驗室分析以及科學的采樣計劃與結果解讀。忽視任何環(huán)節(jié)都可能導致錯誤的結果，進而帶來食品安全風險或造成不必要的生產中斷。務必遵循相關國家標準、行業(yè)規(guī)范或國際標準進行操作。
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