IEC-6 ， 大鼠小腸隱窩上皮細胞
微生物菌種查詢網(wǎng) / 2015-03-24 08:02:00
細胞系描述
細胞庫編號：KCB200720YJ
種屬：大鼠
組織來源：小腸
生長特性：貼壁生長
形態(tài)特征：上皮細胞樣
細胞特性：該細胞表達腸上皮特有抗原。20代以前能保持恒定的生長速度和細胞形態(tài)，此后細胞生長速度會減慢，細胞形態(tài)也會發(fā)生改變。氫化可的松可抑制該細胞的生長。
培養(yǎng)條件：完全培養(yǎng)基： DMEM95%(內(nèi)含2mM Glutamin)+5%胎牛血清+100ug/ml insulin（細胞生長速度變慢后，血清濃度可加到10%）。
血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。用質(zhì)量不好的血清不能保證此細胞會有好的生長狀態(tài).
培養(yǎng)條件：37 ℃，CO2：5%
傳代方法：
收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已長滿（達80-90%），即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過來讓胰酶與細胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶（25cm2）補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。
凍存方法：
凍存液：90%完全培養(yǎng)液，10%DMSO（細胞培養(yǎng)級），現(xiàn)用現(xiàn)配。
儲 存：
液氮。
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