細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題解答
微生物菌種查詢網(wǎng) / 2015-03-11 14:08:50
細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題解答
培養(yǎng)液 pH 值變化太快
可能原因：1，CO2 張力不對(duì)。
2，培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。
3，NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。,
4，培養(yǎng)液中鹽濃度不正確
5，細(xì)菌、酵母或真菌污染
建議解決方法：1）按培養(yǎng)液中 NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度，2.0g/L 到 3.7g/L 濃度 NaHCO3 對(duì)應(yīng) CO2 濃度為 5％ 到 10％。
2）改用不依賴 CO2 培養(yǎng)液。
松開(kāi)瓶蓋 1/4 圈。
3）加 HEPES 緩沖液至 10 到 25mM 終濃度。
在 CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于 Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)
液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用 Hanks 鹽配制的培養(yǎng)
液。
4）丟棄培養(yǎng)物。
5）或用抗生素除菌。
可能原因：1，培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變
,2，用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來(lái),
3，可能原因：冰凍保存培養(yǎng)液用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌。
將培養(yǎng)液加熱到 37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，
丟棄培養(yǎng)液。
培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：1，培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú) CO2,2，培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大,3，細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷,4，培養(yǎng)液滲透壓不正確,5，培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積,6，檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi) CO2
建議解決方法：1）檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度
2）取新的保存細(xì)胞種
3）檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受
4）滲透壓為 260 – 350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。
5）換入新鮮培養(yǎng)液
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