菌種保藏：甘油冷凍保藏法本方法適合于中、長期菌種保藏，保藏時間一般為2-4年左右。
（1）用火焰滅菌的接種環(huán)取斜面菌種在平皿上劃線分離單菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24-48小時，至單菌落的大小為3mm左右。
（3）挑取一個單菌落，接種于一個裝50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振蕩培養(yǎng)10-15小時，至菌密度OD600為1.0-1.5。
（4）用火焰滅菌的接種環(huán)取少量種子液，涂片后，作革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體的形態(tài)，及是否有雜菌。（5）按30%甘油：種子液為1：1（V/V）的量加入無菌甘油，混合后分裝至事先滅菌的菌種保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
甘油保存菌種方法的改良摘要:
目的：將甘油原液保存菌種方法進行改良，尋找一種簡便易行的保存實驗室各種菌種的方法。
方法：將一般細菌的菌種純化后接種于普通肉湯管，4～6h增菌后，加入適量甘油一生理鹽水保存液，-20℃冰箱保存；鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌株純化后接種于血清肉湯管，在5％～10％CO2中經(jīng)8～10h增菌后，加入適量保存液，80℃低溫冰箱保存；真菌菌種純化后直接取菌洗入肉湯，不做培養(yǎng)，加入保存液后，-20℃冰箱保存。結果在連續(xù)3年實驗期內，各菌種保存效果良好，且其形態(tài)結構、染色特性、生化反應等與標準株相符。結論使用甘油生理鹽水保存法來保存菌種，各菌種保存時間長，方法簡便，特別是使鏈球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般實驗室得以保存。菌種的甘油冷凍保存法摘要:以體積分數(shù)為０．８的甘油生理直國水為保存液，在－２０℃保存軍團菌、葡萄球菌等３５個菌株，觀察９年，效果良好。
醫(yī)學微生物教學用菌種保存方法的比較摘要:
目的：尋求一種簡便實用的有效保存各種教學用菌種的方法。
方法：將各待保存的菌種純化后用取菌環(huán)直接從平板上刮取，置于盛有0.5ml各保存液的菌種瓶中，甘油原液-20℃保存，石蠟油和兔防凝血4℃保存。結果在連續(xù)52個月的實驗期內，甘油保存的各菌種效果較好，且各菌生化反應、形態(tài)結構、染色特性等與標準株相符。結論甘油保存法操作簡便，保存時間長，適用于微生物教學用各菌種的保存。甘油保存菌種方法的改良.pdf菌種的甘油冷凍保存法.pdf醫(yī)學微生物教學用菌種保存方法的比較.用甘油保存過細菌，酵母，霉菌和放線菌，40%-50%的甘油是它的最終濃度。甘油濃度過低低溫保存易結冰，使菌死亡。我同學有直接將菌液-20保存的，不加任何保護劑，但保存的時間很短，他們保存過一年的，但很多有死掉的。我們做大腸桿菌感受態(tài)，最終甘油是15%的濃度，有時結冰也會使菌死掉。我用40%-50%的甘油最終濃度一直很好，也不結冰。甘油一般是用那種藍蓋的小管（1毫升）滅菌，放0.7毫升左右的甘油，然后加菌懸液0.1至0.2毫升即可。甘油菌種比列為7：1.