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熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求
1、蓋玻片
蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強(qiáng)激發(fā)光，也可用干涉蓋玻片，這是一種特制的表面鍍有若干層對(duì)不同波長(zhǎng)的光起不同干涉作用的物質(zhì)（如氟化鎂）的蓋玻片，它可以使熒光順利通過，而反射激發(fā)光，這種反射的激發(fā)光又可激發(fā)標(biāo)本。
2、載玻片
載玻片厚度應(yīng)在0.8-1.2mm之間，太厚的載玻片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚焦。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發(fā)熒光。有時(shí)需用石英玻璃載玻片。
3、標(biāo)本
組織切片或其它標(biāo)本不能太厚，如果太厚，激發(fā)光大部消耗在標(biāo)本下部，而物鏡直接觀察到的上部不能充分激發(fā)。另外，細(xì)菌重疊或雜質(zhì)掩蓋，背景非特異性染色引起的熒光會(huì)影響結(jié)果判定。
4、封裱劑
封裱劑常用甘油，必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5-9.5時(shí)較高，不會(huì)很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/L pH9.0-9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作為封裱劑。如果用抗褪色劑封裱熒光染色標(biāo)本更有利于顯微攝影。西方是將P-次苯基二胺二氫氯100mg加入PBS 10ml中，調(diào)pH9.0-9.5，再加入甘油90ml，混勻，在室溫放置過夜，待其中的氣泡完全消失即可作用。
5、鏡油
一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須使用鏡油，最好使用特制的無熒光鏡油，可用甘油代替，也可用液體石蠟，只是折光率較低，對(duì)圖像質(zhì)量略有影響。對(duì)于落射光熒光顯微鏡，則無須鏡油。
熒光顯微鏡的使用注意事項(xiàng)
1、嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。
2、應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，打開超高壓汞燈5-15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。
3、防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整淘汰時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
4、檢查觀察時(shí)間每次以1-2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3-5min后，熒光也明顯減弱或褪色；所以連續(xù)觀察最多不得超過2-3h。
5、標(biāo)本染色后應(yīng)立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4°C保存，可延緩熒光減弱時(shí)間。
6、熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)請(qǐng)注意降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄后欲再啟用時(shí)，須待燈充分冷卻后才能再打開。一天中應(yīng)避免數(shù)次打開光源。