大腸埃希氏菌生化與鑒定--ATCC菌種
大腸埃希菌是人體不可缺少單細(xì)胞生物。大腸埃希菌，俗名大腸桿菌（ 革蘭氏陰性短桿菌），周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽。是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌。大腸埃希菌的致病物質(zhì)之一是血漿凝固酶。根據(jù)致病性的不同，致瀉性大腸埃希菌被分為產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌、腸道侵襲性大腸埃希菌、腸道致病性大腸埃希菌、腸集聚性黏附性大腸埃希菌和腸出血性大腸埃希菌5種。
初步生化試驗(yàn)
在CT-SMAC 和改良CHROMagar O157 顯色瓊脂平板上挑取5 個(gè)～10 個(gè)典
型或可疑菌落，分別接種TSI 瓊脂，同時(shí)接種MUG-LST 肉湯，并用已知MUG陽(yáng)性的大腸埃希氏菌株做對(duì)照，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。必要時(shí)進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)和革蘭氏染色。在TSI 瓊脂中，典型菌株為斜面與底層均呈黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生硫化氫（H2S）。置MUG-LST 肉湯管于長(zhǎng)波紫外燈下觀(guān)察，MUG陽(yáng)性的大腸埃希氏菌株應(yīng)有熒光產(chǎn)生，大腸埃希氏O157:H7/NM 無(wú)熒光；對(duì)分解乳糖且無(wú)熒光的菌株，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分純，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，并進(jìn)行下列鑒定。
鑒定
生化試驗(yàn)
用API20E 生化鑒定試劑盒或VITEK-GNI+檢測(cè)卡，按照生產(chǎn)商提供的使用說(shuō)明進(jìn)行。大腸埃希氏菌O157:H7/NM 生化反應(yīng)特征見(jiàn)表。
血清學(xué)試驗(yàn)
在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取分純的菌落，用O157:H7 標(biāo)準(zhǔn)血清或O157 乳膠凝集試劑作玻片凝集試驗(yàn)。對(duì)于H7 因子血清不凝集者，應(yīng)穿刺接種半固體瓊脂，檢查動(dòng)力，經(jīng)連續(xù)傳代3 次，動(dòng)力試驗(yàn)陰性，H7 因子血清凝集陰性者，確定為無(wú)動(dòng)力株。
生化試驗(yàn) 特征反應(yīng)
西蒙氏檸檬酸鹽 陰性
賴(lài)氨酸脫羧酶 陽(yáng)性（紫色）
鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 陽(yáng)性（紫色）
纖維二糖發(fā)酵 陰性
棉子糖發(fā)酵 陽(yáng)性
MUG 試驗(yàn) 陰性（無(wú)熒光）
動(dòng)力試驗(yàn) 有動(dòng)力或無(wú)動(dòng)力
三糖鐵瓊脂 底層及斜面呈黃色，H2S 陰性
山梨醇 陰性或遲緩發(fā)酵
靛基質(zhì) 陽(yáng)性
MR-VP MR 陽(yáng)性，VP 陰性
氧化酶 陰性
細(xì)菌的分離鑒定
1、標(biāo)本：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。
2、分離培養(yǎng)與鑒定：糞便標(biāo)本直接接種腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。血液需先經(jīng)肉湯增菌，再轉(zhuǎn)種血瓊脂平板。其他標(biāo)本可同時(shí)接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。37℃孵育18～24小時(shí)后，觀(guān)察菌落并涂片染色鏡檢。采用一系列生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定。腸致病性大腸桿菌須先作血清學(xué)定型試驗(yàn)。必要時(shí)檢定腸霉毒素。
泌尿系統(tǒng)除確定大腸桿菌外，還應(yīng)計(jì)數(shù)，每毫升尿含菌量≥100，000時(shí)，才有診斷價(jià)值。