中國微生物菌種查詢網(wǎng)培養(yǎng)基是絕大多數(shù)微生物試驗的基礎(chǔ)。因此,培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物試驗成功與否的關(guān)鍵因素。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。
一、培養(yǎng)基的配制要求
1、培養(yǎng)基若于非潔凈的玻璃器皿中制備,可能導(dǎo)致抑菌物質(zhì)進入培養(yǎng)基中。抑菌物質(zhì)可能是殘留的玻璃器皿清潔用的清潔劑或之前玻璃器皿所盛裝的物質(zhì)。因此。應(yīng)使用純化水完全沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留,并進行清除污物的確認。
2、配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水,特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水,對熱敏感的培養(yǎng)基應(yīng)用滅菌水和無菌容器配制與分裝,配制時若需加熱助溶應(yīng)注意溫度不要過高
3、培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基,脫水培養(yǎng)基除附有處方和使用說明外還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性試驗的質(zhì)控菌株和用途。配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作,受潮結(jié)塊不能使用,以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。
4、配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角燒瓶、刻度吸管、試管、培養(yǎng)皿等。使用的器皿應(yīng) 洗凈,用蒸餾水沖凈,烘干后方可使用。禁用金屬容器如鐵、銅、鋁容器,避免金屬離子與培養(yǎng)基成分結(jié)合,生成有害物質(zhì),影響細菌生長。
5、對配制培養(yǎng)基的過程作詳細的記錄,記錄內(nèi)容包括:配制日期、培養(yǎng)基名稱、成分、配制數(shù)量、質(zhì)量監(jiān)控結(jié)果等進行全面詳細記錄。
二、培養(yǎng)基的貯藏要求
⑴商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說明書上的要求進行儲存。培養(yǎng)基標簽上應(yīng)標有批號,生產(chǎn)日期、有效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性。所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去水分并提供機械保護。
⑵配制好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃避光的環(huán)境。若保存于非密閉容器中,一般在三周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中,一般在一年內(nèi)使用,瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放,防止冷凍破壞凝膠特性。若培養(yǎng)基要長期保存,瓊脂平板應(yīng)密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分流失。
⑶培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)立即取出,不得儲藏在高壓 菌器中,避免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃、避光的環(huán)境。
⑷保存于密閉容器中,可防止水分流失以延長保存時間。
⑸固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進行,只允許一次,融化的培養(yǎng)基應(yīng)放在45~50℃的水浴中,不得超過8小時。
三、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制要求
目前,許多實驗室為了操作方便,多使用脫水培養(yǎng)基進行配制或購買已制備好的分裝于培養(yǎng)皿或玻璃容器的商業(yè)培養(yǎng)基。
經(jīng)實驗室配制或由生產(chǎn)廠生產(chǎn)的培養(yǎng)基的質(zhì)量高度依賴于其如何制備,采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇,從而影響試驗結(jié)果的可靠性。
所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進行驗證,驗證方法參照《中國藥典2010年版》附錄無菌檢查或微生物限度檢查項下有關(guān)規(guī)定進行。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是外觀、性狀、pH、促生長試驗、定期的穩(wěn)定性檢查以及培養(yǎng)基有效期的確定。培養(yǎng)基的有效期是指已通過促生長試驗的培養(yǎng)基在整個有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標準。每批培養(yǎng)基儲存的時間將取決于一定存放條件(包括容器和密封性)的培養(yǎng)基組成成分的穩(wěn)定性。
當(dāng)批培養(yǎng)基不符合促生長試驗,應(yīng)尋找造成不合格的原因。這個調(diào)查包括采取適當(dāng)?shù)男袆右苑乐箚栴}的重復(fù)出現(xiàn)。如果未找到原因或還沒有解決有關(guān)培養(yǎng)基的促生長問題,那么任何不符合要求的批次均不能使用。
一些用于進一步鑒定微生物的診斷試劑,如革蘭染色、氧化酶試驗試劑等。它們與培養(yǎng)基相似點可能是質(zhì)量控制試驗。在試劑用于未知樣品鑒定前,選擇正確的標準質(zhì)控菌,按使用說明上的要求進行質(zhì)控試驗。
培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,最好現(xiàn)配現(xiàn)用。