ATCC菌種說(shuō)明書之百日咳鮑特菌Bordetella pertussis百日咳鮑特菌為卵圓形短小桿菌，大小為0.5～1.5×0.2～0.5um，屬鮑特氏菌屬Bordetella)，無(wú)鞭毛、芽胞。革蘭氏染色陰性。用甲苯胺藍(lán)染色可見(jiàn)兩極異染顆粒。專性需氧，初次分離培養(yǎng)時(shí)營(yíng)養(yǎng)要求較高，需用馬鈴薯血液甘油瓊脂培養(yǎng)基（即鮑～金氏培養(yǎng)基）才能生長(zhǎng)。經(jīng)37℃2～3天培養(yǎng)后，可見(jiàn)細(xì)小、圓形、光滑、凸起、銀灰色、不透明的菌落，周圍有模糊的溶血環(huán)。液體培養(yǎng)呈均勻混濁生長(zhǎng)，并有少量粘性沉淀。
一、菌種簡(jiǎn)介
菌種名稱：百日咳鮑特菌
培養(yǎng)溫度：37°C
培養(yǎng)時(shí)間：48 小時(shí)
平臺(tái)編號(hào)：bio-67917
其他編號(hào)：ATCC 9340
二、培養(yǎng)基：
ATCC Medium: 35 Bordet Gengou Agar
Agar Medium:
Bordet-Gengou Agar Base (BD 248200)…………………….30.0 g
Glycerol………………………………………………….………10.0 ml
Proteose Peptone……………………………………….……..10.0 g
DI Water…………………………………………………………840 ml
Adjust for pH 6.7 +/- 0.2. Autoclave at 121? C. Cool base medium to 45-50?C and add:
Sterile Defibrinated Rabbit Blood…………….……………….150 ml
三、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存
注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種
在 1-2 個(gè)斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足
而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接；凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)
聯(lián)系。
單層凍干管打管說(shuō)明書
1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3
滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口
處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥并
抽真空保存的，開(kāi)啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用
牛奶作為保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成
復(fù)蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長(zhǎng)，如在說(shuō)明書建議的培養(yǎng)
時(shí)間還未長(zhǎng)起來(lái)，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)完成；
百日咳鮑特菌生物學(xué)性狀
百日咳鮑特菌生化反應(yīng)弱，一般不發(fā)酵糖類，但分解蔗糖和乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生H2S和吲哚，過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性。本菌常發(fā)生光滑型到粗糙的相變異：Ⅰ相為光滑型，菌落光滑，有莢膜，毒力強(qiáng)；Ⅳ相為粗糙型，菌落粗糙，無(wú)莢膜，無(wú)毒力。Ⅱ、Ⅲ相為過(guò)渡相。一般在疾病急性期分離的細(xì)菌為Ⅰ相，疾病晚期和多次傳代培養(yǎng)可出現(xiàn)Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ相的變異。發(fā)生這種變異時(shí)，細(xì)菌形態(tài)、菌落、溶血性、抗原結(jié)構(gòu)和致病力等均出現(xiàn)變異。
百日咳桿菌含有耐熱的菌體（O）抗原和不耐熱的莢膜（K）抗原。前者為鮑特氏菌屬共同抗原，后者僅存于百日咳桿菌。
本菌抵抗力弱。56℃30分鐘、日光照射1小時(shí)可致死亡。對(duì)多粘菌素、氯霉素、紅霉素、氨芐青霉素等敏感，對(duì)青霉素不敏感。