中國微生物菌種查詢網(wǎng)超低溫保藏的微生物必須始終貯存在溫度非常低的環(huán)境中，因此需要液氮罐。在長(zhǎng)期貯存的過程中必須經(jīng)常注意補(bǔ)充液氮。這種貯存方式比凍干法需要更多的經(jīng)費(fèi)，包括為了維持貯存溫度所必要的勞動(dòng)力和液氮等。 超低溫的冷凍保護(hù)劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常用一種由甘油（10％）、二甲亞砜（5％）和培養(yǎng)液制成的混合劑保存多數(shù)的細(xì)胞株。這些化學(xué)試劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)可避免內(nèi)膜的冷凍損傷。
病毒超低溫保存所需材料有：熱收縮塑料管（Nunc Cryoflex），液氮罐，防護(hù)手套和面罩，永久性記號(hào)筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。
方法
1.剪一段兩端各超出冷凍管長(zhǎng)度2cm 的熱收縮塑料管。
2.將含有澄清病毒懸液（組織培養(yǎng)的上清培養(yǎng)基，或組織培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞溶解產(chǎn)物均可）冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內(nèi)，并將蓋子擰緊。
3.將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，插入正確的標(biāo)簽。
4.用噴燈小心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。
5.再小心加熱熱收縮塑料管的兩端，用大號(hào)鑷子夾緊管的端口至完全密封。
6.將密封好的冷凍管快速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍（操作時(shí)要求戴面罩和手套）。
7.將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nèi)，同時(shí)記錄樣品的詳細(xì)的存放位置、實(shí)驗(yàn)編號(hào)和存放日期等。
8.需要用時(shí)，迅速從液氮罐內(nèi)取出所需樣品，并投入37℃水浴箱中解凍后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時(shí)不需要除去熱收縮塑料管。
貯存在低溫容器內(nèi)的細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)必須小心操作。當(dāng)小管被加熱時(shí)，所形成的冰晶會(huì)將細(xì)胞殺死，正確操作就可避免這種事故。只要迅速將樣品解凍就能減少活力的丟失，做法是：將封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。