產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素檢測(cè)
1、動(dòng)物致死性試驗(yàn):將腸道內(nèi)容物稀釋取上清攻毒小白鼠,觀察小白鼠致死情況;
2、毒素中和試驗(yàn)法:是更佳準(zhǔn)確的方法,提取的毒素與毒素抗體中和后攻毒小白鼠,若對(duì)照組死亡,中和組不死亡,則精確表明某型毒素致死;
3、卵磷脂水解試驗(yàn)法:α毒素能分解卵磷脂,產(chǎn)氣莢膜梭菌所有型均能產(chǎn)生α毒素,能驗(yàn)證產(chǎn)氣莢膜梭菌的存在。
這些較為常用的方法中,以毒素中和試驗(yàn)最為特異,但相對(duì)而言這些方法均較費(fèi)時(shí)費(fèi)力,且敏感性較低。
分子生物學(xué)診斷方法
物科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,一些分子水平上的檢測(cè)方法在毒素檢測(cè)上得到了普遍應(yīng)用。Kadra等為了驗(yàn)證PCR的準(zhǔn)確可靠性,用PCR方法對(duì)不同來源的產(chǎn)氣莢膜梭菌及毒素進(jìn)行分型驗(yàn)證,將90株產(chǎn)氣莢膜梭菌用細(xì)菌生化試驗(yàn)等方法進(jìn)行驗(yàn)證,然后用小鼠血清中和試驗(yàn)進(jìn)行定型,再用PCR法擴(kuò)增α、β和ε三種毒素基因片段,最后將兩種定型方法鑒定的血清型進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明,兩種方法定型一致。表明PCR法準(zhǔn)確可靠,且比小鼠的血清中和試驗(yàn)節(jié)約成本,方便可靠。于曉霞等為了尋找一種快速、準(zhǔn)確的方法檢測(cè)產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型,采用SDS-PAGE的方法,對(duì)不同的產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株所產(chǎn)的外毒素蛋白進(jìn)行分子量測(cè)定,從而確定所產(chǎn)外毒素的種類,確定菌株型。Fach等首先研究了用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測(cè)毒素,參考毒素其他桿菌的磷脂酶C基因,設(shè)計(jì)了保守區(qū)域的針對(duì)基因特異性的引物,用PCR法擴(kuò)增除了基因片段與毒素基因內(nèi)的序列完全一致,表明可以使用PCR方法檢測(cè)毒素基因,從而驗(yàn)證細(xì)菌型。Warren等應(yīng)用PCR方法對(duì)包埋在福爾馬林里的含有產(chǎn)氣莢膜梭菌的病料進(jìn)行基因檢測(cè),擴(kuò)增到了α、β和ε毒素基因,雖然產(chǎn)氣莢膜梭菌已經(jīng)死亡,但產(chǎn)氣莢膜梭菌基因依然沒有被破壞,因而PCR方法可以檢測(cè)死亡產(chǎn)氣莢膜梭菌的存在。