幽門螺桿菌特征及其培養(yǎng)
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-02-23 13:50:54
幽門螺桿菌，Helicobacter pylori，簡稱Hp。首先由巴里·馬歇爾(Barry J. Marshall)和羅賓·沃倫(J. Robin Warren)二人發(fā)現(xiàn)，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。
形態(tài)學(xué)特征
幽門螺桿菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌。長2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。革蘭染色陰性。有動力。在胃粘膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養(yǎng)基上生長時，除典型的形態(tài)外，有時可出現(xiàn)桿狀或圓球狀。
電子顯微鏡下，菌體的一端可伸出2～6條帶鞘的鞭毛。在分裂時，兩端均可見鞭毛。鞭毛長約為菌體1～1.5倍。粗約為30nm。鞭毛的頂端有時可見一球狀物，實為鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可見一個圓球狀根基伸入菌體頂端細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)。在其內(nèi)側(cè)尚有一電子密度降低區(qū)域。鞭毛在運動中起推進器作用，在定居過程中起拋錨作用。
生理學(xué)和分子生物學(xué)特征
幽門螺桿菌是微需氧菌，環(huán)境氧要求5～8%，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下不能生長。許多固體培養(yǎng)基可作幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補充物方能生長。常以萬古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。
幽門螺桿菌對臨床微生物實驗中常用于鑒定腸道細(xì)菌的大多數(shù)經(jīng)典生化實驗不起反應(yīng)。而氧化酶、觸酶、尿素酶、堿性磷酸酶、r－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、亮氨酸肽酶這七種酶反應(yīng)是作為幽門螺桿菌生化鑒定的依據(jù)。
幽門螺桿菌的全基因序列已經(jīng)測出，其中尿素酶基因有四個開放性讀框，分別是UreA、 UreB、 UreC 和UreD。UreA和UreB編碼的多肽與尿素酶結(jié)構(gòu)的兩個亞單位結(jié)構(gòu)相當(dāng)。幽門螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當(dāng)于變形桿菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保護細(xì)菌在高酸環(huán)境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分別編碼空泡毒素和細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白。
根據(jù)這兩種基因的表達(dá)情況，又將幽門螺桿菌菌株分成兩種主要類型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表達(dá)兩種蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表達(dá)兩種蛋白，尚有一些為中間表達(dá)型，即表達(dá)其中一種毒力因子?，F(xiàn)在多認(rèn)為Ⅰ型與胃疾病關(guān)系較為密切。
培養(yǎng)
用于培養(yǎng)的胃粘膜活檢標(biāo)本應(yīng)置于生理鹽水、營養(yǎng)肉湯或20％葡萄糖中，然后立即轉(zhuǎn)送到細(xì)菌室培養(yǎng)。如果標(biāo)本不能在4個小時內(nèi)培養(yǎng)，就應(yīng)放在4攝氏度保存，但不宜超過24小時。長期保存用于培養(yǎng)的活檢標(biāo)本的唯一方法是將其置于－70攝氏度或液氮之中。
培養(yǎng)幽門螺桿菌的培養(yǎng)基包括非選擇性及選擇性兩種。常用的非選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂以及Wilkins-Chalgren瓊脂。培養(yǎng)基中需加7％－10％的去纖維蛋白馬血。羊血、人血、馬血清、氯化血紅素、淀粉、膽固醇或環(huán)糊精(cyclodextrins） 也可代替馬血。選擇培養(yǎng)基則是在上述 培養(yǎng)基中添加一定的抗菌藥物，如萬古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B以及甲氧芐氨嘧啶（TMP）。
常用的有Skirrow 配方及Dent 配方。前者原用于彎曲菌的培養(yǎng)，亦可用于幽門螺桿菌培養(yǎng)。后者為前者的改良，即將多粘菌素用頭孢磺啶取代，因為少數(shù)（5％左右）幽門螺桿菌菌株對多粘菌素敏感。Drnt配方為萬古霉素（10mg／L）、頭孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性霉素B（5mg／L）。有報道指出，部分菌株對啶酸敏感，因而培養(yǎng)基中應(yīng)盡量避免作用該抗生素。
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