空腸彎曲桿菌的培養(yǎng)條件與鑒定方法及致病性與應(yīng)用場(chǎng)景！
小楊 / 2025-12-02 10:57:40
空腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni）是革蘭氏陰性、微需氧、彎曲桿狀細(xì)菌，屬于彎曲桿菌屬（Campylobacter），是全球范圍內(nèi)引起急性腸胃炎的首要食源性致病菌之一。以下從生物學(xué)特性、培養(yǎng)條件、代謝特征、鑒定方法、致病性與應(yīng)用場(chǎng)景等核心維度展開(kāi)詳細(xì)解析，聚焦實(shí)踐操作與鑒定關(guān)鍵要點(diǎn)：
一、核心生物學(xué)特性（鑒定基礎(chǔ)）
1、形態(tài)與結(jié)構(gòu)
形態(tài)：呈螺旋形或彎曲桿狀（0.2-0.5 μm × 0.5-5 μm），無(wú)芽孢，一端或兩端有單鞭毛（運(yùn)動(dòng)活潑，呈“螺旋式”運(yùn)動(dòng)，顯微鏡下易觀察）。
革蘭氏染色：陰性（注意：染色時(shí)需避免過(guò)度脫色，因細(xì)胞壁較薄，易出現(xiàn)假陽(yáng)性）。
抵抗力：對(duì)氧氣敏感（微需氧），不耐熱（60℃ 10 分鐘可殺滅），對(duì)干燥、胃酸、常用消毒劑敏感；4℃冷藏條件下可存活數(shù)天（食品冷鏈中易傳播）。
2、基因組特征
基因組大小約 1.6-1.8 Mb，G+C 含量 30-35%（低 GC 特征，可作為分類(lèi)輔助指標(biāo)）。
攜帶多種毒力基因，與致病性密切相關(guān)。
二、培養(yǎng)條件（分離純化關(guān)鍵）
空腸彎曲桿菌為微需氧菌（最適氧氣濃度 5-10%，二氧化碳濃度 10%），營(yíng)養(yǎng)需求較高，常規(guī)培養(yǎng)基需添加血液、血清等成分，分離時(shí)需抑制雜菌生長(zhǎng)：
培養(yǎng)條件 具體要求
培養(yǎng)基 1.選擇性培養(yǎng)基：Skirrow 培養(yǎng)基、Campy-BAP 培養(yǎng)基；2.非選擇性培養(yǎng)基：布氏肉湯 + 5% 馬血/羊血（用于純培養(yǎng)擴(kuò)增）。
培養(yǎng)環(huán)境 微需氧環(huán)境（可通過(guò)厭氧罐 + 微需氧產(chǎn)氣袋實(shí)現(xiàn)，或使用二氧化碳培養(yǎng)箱調(diào)節(jié)氣體比例）。
溫度與時(shí)間 最適溫度 42℃（嗜熱特性，區(qū)別于其他彎曲桿菌，如結(jié)腸彎曲桿菌最適 37℃），培養(yǎng) 48-72 小時(shí)。
菌落特征 42℃培養(yǎng)后，菌落呈圓形、凸起、光滑、濕潤(rùn)，直徑 1-2 mm，顏色為灰色或乳白色，血平板上不溶血或輕微 α 溶血（無(wú) β 溶血，可與鏈球菌區(qū)分）。
注意事項(xiàng)：
樣品處理：糞便、食品樣品需先接種選擇性增菌液，37℃預(yù)增菌 24 小時(shí)后，再轉(zhuǎn)種選擇性平板（提高分離率）；
避免氧氣暴露：接種后盡快放入微需氧環(huán)境，培養(yǎng)基表面可覆蓋石蠟油減少氧氣接觸；
溫度控制：嚴(yán)格控制 42℃培養(yǎng)，溫度過(guò)高（>45℃）或過(guò)低（<37℃）會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢或不生長(zhǎng)。
三、代謝特征（生化鑒定核心）
空腸彎曲桿菌生化反應(yīng)不活潑，氧化酶、觸酶陽(yáng)性是關(guān)鍵特征，具體生化指標(biāo)如下：
生化試驗(yàn) 結(jié)果
氧化酶 +（強(qiáng)陽(yáng)性，滴加氧化酶試劑后 10 秒內(nèi)出現(xiàn)紫色，可快速篩選）
觸酶 +（產(chǎn)生氣泡，區(qū)別于厭氧菌）
葡萄糖發(fā)酵 -（不發(fā)酵糖類(lèi)，僅通過(guò)氨基酸、有機(jī)酸作為碳源）
硫化氫產(chǎn)生 -（TSI 培養(yǎng)基中不產(chǎn) H?S，區(qū)別于沙門(mén)氏菌）
脲酶 -（區(qū)別于幽門(mén)螺桿菌，幽門(mén)螺桿菌脲酶陽(yáng)性）
硝酸鹽還原 +（還原硝酸鹽為亞硝酸鹽）
馬尿酸水解 +（關(guān)鍵鑒別特征，95% 以上空腸彎曲桿菌陽(yáng)性，結(jié)腸彎曲桿菌、直腸彎曲桿菌陰性）
四、鑒定方法（從初篩到確認(rèn)）
1、傳統(tǒng)鑒定流程（實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法）
樣品處理
選擇性增菌（48h, 37℃）
轉(zhuǎn)種Skirrow/Campy-BAP平板（42℃, 微需氧, 48h）
菌落形態(tài)觀察（灰色、光滑、不溶血）
革蘭氏染色（陰性彎曲桿菌）+ 動(dòng)力觀察（螺旋式運(yùn)動(dòng)）
生化試驗(yàn)（氧化酶+、觸酶+、馬尿酸水解+）
最終鑒定為空腸彎曲桿菌
2、分子生物學(xué)鑒定（精準(zhǔn)快速，適用于批量檢測(cè)）
PCR 技術(shù)：
靶基因：hipO 基因（空腸彎曲桿菌特異性基因，編碼組氨酸磷酸酶，其他彎曲桿菌無(wú)）、flaA 基因（鞭毛基因，可用于分型）；
引物示例（hipO）：上游 5'-GCT TTA TTT GTT GGG TTA CG-3'，下游 5'-CCA CTA TTT TTA AAT TGC GC-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物約 340 bp；
優(yōu)勢(shì)：靈敏度高（可檢測(cè) 10² CFU/mL），耗時(shí)僅 4-6 小時(shí)，適用于食品、臨床樣品快速篩查。
測(cè)序鑒定：
16S rRNA 基因測(cè)序（通用引物 27F/1492R 擴(kuò)增，測(cè)序后與 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，相似度≥97% 可確認(rèn)屬，≥99% 可確認(rèn)種）；
multilocus sequence typing（MLST）：基于 7 個(gè)管家基因（aspA、glnA 等）測(cè)序分型，用于流行病學(xué)溯源。
3、血清學(xué)鑒定（分型輔助）
基于 O 抗原（脂多糖抗原）分為多個(gè)血清型，常用玻片凝集試驗(yàn)（使用特異性抗血清），適用于菌株流行病學(xué)分類(lèi)，但操作較繁瑣，臨床應(yīng)用較少。
五、致病性與臨床意義
1、致病機(jī)制
黏附與侵襲：通過(guò)鞭毛運(yùn)動(dòng)到達(dá)腸道上皮細(xì)胞，經(jīng) cadF 基因編碼的蛋白黏附，ciaB 基因介導(dǎo)侵襲進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞損傷；
毒素釋放：產(chǎn)生細(xì)胞毒素，破壞腸道上皮細(xì)胞，引起炎癥反應(yīng)。
2、臨床癥狀
潛伏期 2-5 天，主要表現(xiàn)為急性腸胃炎：腹痛、腹瀉、發(fā)熱（38-40℃），部分患者伴有惡心、嘔吐；
并發(fā)癥：少數(shù)患者（約 1/1000）感染后 1-4 周可出現(xiàn)吉蘭 - 巴雷綜合征、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等。
3、傳播途徑
主要通過(guò)食源性傳播（食用未煮熟的雞肉、牛肉、豬肉，或污染的牛奶、水源）；
接觸傳播（如接觸感染家禽、寵物，或患者糞便污染的環(huán)境）。
六、應(yīng)用場(chǎng)景與質(zhì)量控制
1、主要應(yīng)用領(lǐng)域
臨床診斷：腹瀉患者糞便樣品中分離鑒定
空腸彎曲桿菌，明確病因；
食品衛(wèi)生檢測(cè)：雞肉、生鮮肉類(lèi)、乳制品的微生物污染篩查（我國(guó) GB 2760-2014 規(guī)定，食品中空腸彎曲桿菌不得檢出）；
流行病學(xué)調(diào)查：通過(guò) MLST 分型追蹤疫情來(lái)源，分析傳播鏈。
2、鑒定質(zhì)量控制要點(diǎn)
陽(yáng)性對(duì)照：使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如
ATCC 33560）進(jìn)行平行培養(yǎng)，確保培養(yǎng)基、試劑、儀器正常；
生化試驗(yàn)質(zhì)量：馬尿酸水解試驗(yàn)需設(shè)置陽(yáng)性（
空腸彎曲桿菌標(biāo)準(zhǔn)株）和陰性（
結(jié)腸彎曲桿菌）對(duì)照，避免試劑失效導(dǎo)致假結(jié)果；
分子檢測(cè)質(zhì)控：PCR 反應(yīng)中加入內(nèi)參基因，排除抑制物干擾導(dǎo)致的假陰性。
七、與相似菌株的鑒別要點(diǎn)
空腸彎曲桿菌易與其他彎曲桿菌屬菌株（如結(jié)腸彎曲桿菌、直腸彎曲桿菌）及幽門(mén)螺桿菌混淆，關(guān)鍵鑒別特征如下：
菌株 關(guān)鍵鑒別特征
空腸彎曲桿菌 42℃生長(zhǎng)（+）、馬尿酸水解（+）、脲酶（-）、氧化酶（+）
結(jié)腸彎曲桿菌 42℃生長(zhǎng)（-）、馬尿酸水解（-）、醋酸吲哚水解（+）
直腸彎曲桿菌 42℃生長(zhǎng)（-）、馬尿酸水解（-）、醋酸吲哚水解（-）
幽門(mén)螺桿菌 脲酶（+）、微需氧但最適 37℃生長(zhǎng)、不溶血、對(duì)萬(wàn)古霉素敏感（空腸彎曲桿菌耐藥）
八、總結(jié)
空腸彎曲桿菌的鑒定核心圍繞嗜熱微需氧特性、典型生化反應(yīng)（氧化酶 +、馬尿酸水解 +）、分子特異性基因檢測(cè)展開(kāi)。實(shí)踐中需注意樣品前處理的增菌步驟、培養(yǎng)環(huán)境的氧氣控制，結(jié)合傳統(tǒng)生化與分子方法可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)鑒定。該菌作為食源性致病菌，其快速檢測(cè)與分型對(duì)臨床治療、食品安全防控具有重要意義。
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