TGY瓊脂的前期準備與滅菌處理及配制與使用方法！
小楊 / 2025-10-27 09:08:53
TGY瓊脂是一種常用的細菌培養(yǎng)基，主要成分為胰蛋白胨（Tryptone）、葡萄糖（Glucose）、酵母提取物（Yeast extract），廣泛用于細菌的分離、培養(yǎng)和計數(shù)等實驗，其使用方法需遵循培養(yǎng)基操作的標準流程，具體步驟如下：
一、前期準備
1、試劑與器材準備
核心試劑：TGY 瓊脂干粉（按配方比例配置，通常每升蒸餾水對應(yīng)特定質(zhì)量的干粉，如常見配方為胰蛋白胨 10g、葡萄糖 5g、酵母提取物 5g、瓊脂 15-20g）、蒸餾水。
實驗器材：錐形瓶、燒杯、玻璃棒、高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)皿、無菌移液管、酒精燈、超凈工作臺等。
輔助用品：標簽紙、記號筆、恒溫培養(yǎng)箱。
2、實驗環(huán)境預(yù)處理
超凈工作臺提前 30 分鐘開啟紫外燈消毒，使用前關(guān)閉紫外燈并通風(fēng) 10-15 分鐘；實驗臺面用 75% 酒精擦拭消毒。
所有需滅菌的器材（如錐形瓶、移液管、培養(yǎng)皿等）需提前經(jīng)高壓蒸汽滅菌或干熱滅菌處理。
二、培養(yǎng)基配制
1、稱量與溶解
根據(jù)實驗所需體積，準確稱量 TGY 瓊脂干粉置于錐形瓶中，加入對應(yīng)量的蒸餾水（例如配制 500mL 培養(yǎng)基，需按配方比例減半稱量干粉，加入 500mL 蒸餾水）。
用玻璃棒攪拌均勻，必要時可置于水浴鍋中加熱（40-60℃），促進干粉充分溶解，避免瓊脂結(jié)塊。
2、調(diào)節(jié) pH 值（可選）
若實驗對 pH 有特定要求（通常細菌培養(yǎng)適宜 pH 為 7.0-7.4），可在溶解后用 1mol/L HCl 或 1mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH，使用 pH 計實時監(jiān)測。
3、分裝與標記
將溶解均勻的培養(yǎng)基分裝至錐形瓶中，分裝量不超過錐形瓶容積的 1/2，避免滅菌時溢出。
在錐形瓶上貼標簽，注明培養(yǎng)基名稱（
TGY 瓊脂）、配制日期、配制人及濃度等信息。
三、滅菌處理
1、高壓蒸汽滅菌
將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶用雙層紗布或硅膠塞封口（避免滅菌后污染），放入高壓蒸汽滅菌鍋。
設(shè)定滅菌參數(shù)：121℃、103.4kPa，維持 15-20 分鐘（若培養(yǎng)基體積較大，可適當延長滅菌時間，如 2000mL 培養(yǎng)基可延長至 30 分鐘）。
2、滅菌后冷卻
滅菌結(jié)束后，待滅菌鍋內(nèi)壓力降至常壓、溫度降至 100℃以下時，緩慢打開排氣閥，取出錐形瓶。
將錐形瓶置于超凈工作臺附近，自然冷卻至 50-60℃（手感不燙手為宜，避免溫度過高導(dǎo)致培養(yǎng)皿變形，或過低使瓊脂凝固無法倒平板）。
四、倒平板操作
1、培養(yǎng)皿準備
取出滅菌后的培養(yǎng)皿，在超凈工作臺內(nèi)打開包裝，將培養(yǎng)皿倒置擺放（避免灰塵落入）。
2、倒平板流程
在超凈工作臺內(nèi)，點燃酒精燈，將錐形瓶瓶口靠近火焰滅菌（旋轉(zhuǎn)灼燒 3-5 秒）。
左手握住培養(yǎng)皿底部，右手持錐形瓶，緩慢將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿倒入約 15-20mL（確保培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，無氣泡）。
倒完后迅速蓋上培養(yǎng)皿蓋，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基分布均勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3、凝固與儲存
將倒好的培養(yǎng)皿置于超凈工作臺內(nèi)，水平放置，待培養(yǎng)基自然凝固（約 30-60 分鐘，避免移動導(dǎo)致表面不平整）。
若暫時不使用，凝固后可將培養(yǎng)皿倒置放入 4℃冰箱冷藏儲存，儲存時間不超過 1 周，使用前需提前取出恢復(fù)至室溫。
五、接種與培養(yǎng)
1、接種操作
依據(jù)實驗?zāi)康倪x擇合適的接種方法，如涂布平板法、劃線分離法等。
以涂布平板法為例：在超凈工作臺內(nèi)，用無菌移液管吸取 0.1mL 菌液滴加到 TGY 瓊脂平板表面，用無菌玻璃涂布棒將菌液均勻涂抹在培養(yǎng)基表面，涂抹時避免用力刮擦培養(yǎng)基。
接種后，在培養(yǎng)皿蓋上標記實驗信息（菌株名稱、接種日期、培養(yǎng)條件等）。
2、恒溫培養(yǎng)
將接種后的培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中（避免冷凝水滴落污染菌落），根據(jù)目標細菌的生長需求設(shè)定培養(yǎng)溫度和時間，例如多數(shù)細菌在 37℃下培養(yǎng) 18-24 小時，厭氧菌需在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。
六、后續(xù)觀察與處理
1、菌落觀察
培養(yǎng)結(jié)束后，取出培養(yǎng)皿，觀察菌落的形態(tài)、大小、顏色、邊緣等特征，進行計數(shù)或分離純化。
2、實驗后清理
實驗結(jié)束后，所有使用過的培養(yǎng)基（包括未接種的剩余培養(yǎng)基）需經(jīng)高壓蒸汽滅菌處理后，再進行丟棄或回收，避免環(huán)境污染。
實驗器材按常規(guī)方法清洗、滅菌，備用。
3、注意事項
瓊脂干粉溶解時需充分攪拌，避免未溶解的顆粒導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固后出現(xiàn)不均一現(xiàn)象。
高壓蒸汽滅菌時需確保鍋內(nèi)空氣排盡，否則會影響滅菌效果；滅菌后避免快速排氣，防止培養(yǎng)基暴沸。
倒平板時溫度需控制在 50-60℃，溫度過高易燙傷實驗人員，且可能殺死接種的菌液；溫度過低則瓊脂易凝固，無法順利倒平板。
接種過程需嚴格遵循無菌操作規(guī)范，避免雜菌污染，影響實驗結(jié)果。
不同菌株的培養(yǎng)條件（溫度、時間、氧氣需求等）存在差異，需根據(jù)具體菌株調(diào)整培養(yǎng)參數(shù)。
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