革蘭陰性桿菌分科顯色培養(yǎng)基的使用注意事項及結果判讀！
小楊 / 2025-10-18 16:43:26
一、培養(yǎng)基的儲存和制備
1、儲存條件：
干粉培養(yǎng)基：應密封保存于陰涼（<30°C）、干燥、避光處，并注意防潮。嚴格按照說明書上的有效期使用。
制備好的平板：通常需在2-8°C冰箱中避光保存。冷藏可減緩水分流失和成分降解，但也不宜長期存放，一般建議在1-2周內(nèi)使用完畢。
2、制備過程：
水質(zhì)：必須使用純化水或蒸餾水，避免水中離子干擾。
精確稱量：嚴格按照產(chǎn)品說明書的比例稱量干粉和水量，確保培養(yǎng)基濃度準確。
加熱溶解與滅菌：多數(shù)培養(yǎng)基需要加熱煮沸使其完全溶解，并按照要求進行高壓滅菌（通常為121°C, 15分鐘）。滅菌后應迅速冷卻至約45-50°C（手摸瓶子不燙手為宜）。
添加劑：如果培養(yǎng)基需要額外添加抗生素或其他選擇性添加劑，必須在培養(yǎng)基滅菌并冷卻至適宜溫度后再加入，以免高溫破壞添加劑活性。加入后應輕輕搖勻，避免產(chǎn)生氣泡。
傾注平板：在無菌條件下將培養(yǎng)基傾注入無菌平皿中，厚度要均勻（約4-5mm）。凝固后應烘干表面冷凝水（如35°C培養(yǎng)箱中倒置放置15-30分鐘），以防菌落蔓延。
二、樣本接種和培養(yǎng)
樣本質(zhì)量：確保接種的樣本是新鮮、有代表性的。對于臨床樣本，應優(yōu)先選擇膿液、分泌物等原液進行接種，必要時進行增菌培養(yǎng)。
1、接種方法：
采用分區(qū)劃線法，以獲得單個、分散的菌落，便于觀察和純化。
接種量要適中，過密會導致菌落融合，顏色相互干擾，難以判讀。
2、培養(yǎng)條件：
溫度和時間：通常為35-37°C，需氧培養(yǎng)18-24小時。有些菌生長緩慢或顯色反應需要更長時間，可延長至48小時觀察，但需注意隨時間延長，顏色可能發(fā)生變化。
濕度：培養(yǎng)箱內(nèi)應保持一定的濕度，防止培養(yǎng)基干裂。
三、結果判讀與解釋
這是使用顯色培養(yǎng)基最核心也最容易出錯的環(huán)節(jié)。
嚴格遵循說明書：不同品牌、不同型號的顯色培養(yǎng)基，其菌落顏色與對應菌種的關聯(lián)性可能不同！ 判讀時必須參照當前使用產(chǎn)品的說明書或判讀指南。
典型菌落觀察：重點觀察孤立菌落的顏色和形態(tài)。常見的顏色指示例如（僅供參考，具體以說明書為準）：
注意非典型反應：
菌落變異：同一菌種的不同菌株可能產(chǎn)生顏色差異。
混合顏色：如果一個菌落顯示出混合顏色，可能是純化不徹底，需要重新劃線分離。
弱反應或延遲反應：某些菌可能顯色較慢或顏色較淺，需延長培養(yǎng)時間后再次觀察。
局限性：顯色培養(yǎng)基是初篩工具，不能作為最終鑒定依據(jù)。它通常只能鑒定到“屬”或“群”的水平，無法替代生化試驗、質(zhì)譜或分子生物學等確證方法。
四、質(zhì)量控制
無菌試驗：每批新制備的培養(yǎng)基應隨機抽取1-2個平板，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時，確認無任何微生物生長。
性能驗證（生長試驗）：使用標準菌株驗證培養(yǎng)基的選擇性和顯色特性是否合格。例如：
五、生物安全與廢棄物處理
生物安全：處理可能含有致病菌的樣本和培養(yǎng)后的平板時，必須在相應級別的生物安全柜中進行，并做好個人防護（穿白大褂、戴手套）。
廢棄物處理：所有使用過的培養(yǎng)基、平板均被視為生物危險廢棄物，必須經(jīng)過高壓蒸汽滅菌或其他有效方式滅活后，才能丟棄或清洗。
六、總結要點
階段 核心注意事項
儲存制備 避光防潮、精確稱量、正確滅菌與冷卻、及時使用
接種培養(yǎng) 新鮮樣本、分區(qū)劃線、適宜溫濕度、規(guī)定時間
結果判讀 以說明書為準、觀察單菌落、注意非典型反應、明確其初篩局限性
質(zhì)量控制 定期進行無菌試驗和標準菌株性能驗證
安全環(huán)保 遵守生物安全規(guī)程，廢棄物必須先滅菌后處理
遵循以上注意事項，才能確保革蘭陰性桿菌分科顯色培養(yǎng)基發(fā)揮其快速、簡便的初篩優(yōu)勢，為后續(xù)的精確鑒定提供可靠的基礎。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關系！
下載附件
上一篇：志賀氏菌顯色培養(yǎng)基的顯色原理與使用方法及操作流程！
下一篇：如何提高菌種缺陷短波單胞菌檢測的準確性和靈敏度？