腸球菌顯色培養(yǎng)基的核心原理與標準使用方法及注意事項！
小楊 / 2025-10-16 08:58:13
腸球菌顯色培養(yǎng)基通過特定酶底物反應(yīng)實現(xiàn)腸球菌的選擇性分離與鑒別，能讓目標菌落呈現(xiàn)特征顏色，快速與其他細菌區(qū)分。
一、核心原理
其原理主要基于“選擇性抑制”和“特異性顯色”兩大核心，具體分為兩步：
1、選擇性抑制雜菌
培養(yǎng)基中添加了疊氮鈉或膽汁鹽等抑制劑。
這些成分能抑制革蘭氏陰性菌、真菌以及部分非目標革蘭氏陽性菌（如
葡萄球菌）的生長。
腸球菌對這類抑制劑有較強耐受性，可在培養(yǎng)基上正常繁殖，從而實現(xiàn)“篩選”效果。
2、特異性顯色鑒別
培養(yǎng)基含針對腸球菌特定酶的顯色底物。
腸球菌能產(chǎn)生 β- 葡萄糖苷酶，該酶會分解培養(yǎng)基中的顯色底物，釋放出有色物質(zhì)（通常為藍色或紫色）。
最終腸球菌菌落呈現(xiàn)藍色/紫色，其他未被抑制的雜菌則為無色或其他顏色，實現(xiàn)“鑒別”效果。
二、標準使用方法
使用需遵循“準備 - 接種 - 培養(yǎng) - 觀察”的流程，關(guān)鍵步驟如下：
1、培養(yǎng)基制備
取商品化的腸球菌顯色培養(yǎng)基干粉，按說明書比例（通常為 20-30g/L）加入蒸餾水或純化水。
加熱煮沸并持續(xù)攪拌，確保干粉完全溶解，避免結(jié)塊。
若需滅菌，121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘（具體以說明書為準），滅菌后冷卻至 45-50℃?zhèn)溆谩?/div>
2、樣品接種
取待檢測樣品（如食品勻漿、臨床標本、環(huán)境水樣），采用涂布法或劃線法接種于冷卻后的培養(yǎng)基表面。
涂布法需用無菌 L 型玻棒將樣品均勻涂開，確保菌落分散；劃線法可通過分區(qū)劃線獲得單菌落。
3、培養(yǎng)條件
將接種好的培養(yǎng)基放入 35-37℃恒溫培養(yǎng)箱，需有氧環(huán)境（無需厭氧），培養(yǎng) 18-24 小時。
若部分腸球菌生長較慢，可延長培養(yǎng)至 48 小時，但需注意避免雜菌過度繁殖。
4、結(jié)果判讀
陽性結(jié)果：培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍色或紫色菌落，菌落形態(tài)通常為圓形、邊緣整齊、表面光滑，即為疑似腸球菌。
陰性結(jié)果：無色菌落或其他顏色菌落，均判定為非腸球菌。
若需確認，可挑取特征菌落進行生化試驗或分子生物學(xué)鑒定。
三、注意事項
抑制劑具有毒性，操作時需戴手套，避免接觸皮膚和誤食；培養(yǎng)基廢液需滅菌后再處理。
培養(yǎng)基溶解后需及時使用，若暫時不用，可冷藏（2-8℃）保存，但保存時間不超過 24 小時，使用前需復(fù)溫至室溫。
培養(yǎng)溫度和時間需嚴格遵循說明書，溫度過高可能導(dǎo)致顯色底物失效，時間不足則菌落未充分顯色。
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