志賀菌屬微生物學(xué)檢查的核心依據(jù)與關(guān)鍵步驟及操作流程！
小楊 / 2025-09-23 09:34:54
志賀菌屬的微生物學(xué)檢查核心是分離培養(yǎng)與鑒定，結(jié)合血清學(xué)試驗(yàn)和分子生物學(xué)方法，最終實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)檢測(cè)，為細(xì)菌性痢疾的診斷和治療提供依據(jù)。
該檢查流程通常分為標(biāo)本采集、直接檢查、分離培養(yǎng)、鑒定試驗(yàn)、毒力檢測(cè)及分子生物學(xué)檢測(cè)六個(gè)關(guān)鍵步驟，各環(huán)節(jié)均有嚴(yán)格要求以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
一、標(biāo)本采集
標(biāo)本質(zhì)量直接影響檢測(cè)結(jié)果，需嚴(yán)格遵循“早期、新鮮、正確部位”原則。
采集時(shí)間：發(fā)病早期（最好在服用抗生素前），此時(shí)糞便中細(xì)菌數(shù)量最多，檢出率最高。
采集部位：優(yōu)先選取黏液膿血便，避免采集成形糞便（含菌量極少）。若患者無(wú)糞便，可通過(guò)直腸拭子采集。
標(biāo)本處理：采集后需立即送檢，若無(wú)法及時(shí)送檢（超過(guò) 2 小時(shí)），需將標(biāo)本放入運(yùn)送培養(yǎng)基中保存，防止細(xì)菌死亡。
二、直接檢查
該步驟為初步篩查，快速判斷是否存在可疑菌，但不能確診。
生理鹽水涂片鏡檢：取少量黏液膿血便涂片，革蘭染色后鏡檢。志賀菌屬為革蘭陰性短小桿菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜，多數(shù)無(wú)鞭毛（與沙門(mén)菌的重要區(qū)別）。鏡檢若發(fā)現(xiàn)大量此類(lèi)細(xì)菌，結(jié)合臨床癥狀，可初步懷疑。
抗原檢測(cè)：采用免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等方法，直接檢測(cè)標(biāo)本中的志賀菌抗原。優(yōu)點(diǎn)是快速（1-2 小時(shí)出結(jié)果），適合早期診斷或大規(guī)模流行病學(xué)篩查，但特異性略低于培養(yǎng)法，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
三、分離培養(yǎng)
分離培養(yǎng)是確診志賀菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)之一，可獲得純菌株用于后續(xù)鑒定。
培養(yǎng)基選擇：
先接種于腸道選擇培養(yǎng)基，如 SS 瓊脂（沙門(mén)菌 - 志賀菌瓊脂）、麥康凱瓊脂或中國(guó)藍(lán)瓊脂，抑制雜菌生長(zhǎng)，選擇性培養(yǎng)腸道致病菌。
志賀菌在 SS 瓊脂上生長(zhǎng)后，形成無(wú)色、半透明、光滑、較小的菌落（直徑 1-2mm），因不發(fā)酵乳糖，故菌落周?chē)鸁o(wú)紅色環(huán)（乳糖發(fā)酵菌如大腸桿菌會(huì)形成紅色菌落）。
培養(yǎng)條件：37℃需氧培養(yǎng) 18-24 小時(shí)，若培養(yǎng) 48 小時(shí)仍無(wú)菌落生長(zhǎng)，可報(bào)告“未檢出志賀菌屬”。
純培養(yǎng)：挑取可疑菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂或雙糖鐵培養(yǎng)基（TSI） ，獲得純菌株并進(jìn)行初步生化反應(yīng)判斷。
四、鑒定試驗(yàn)
通過(guò)生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗(yàn)，明確是否為志賀菌屬及具體血清型。
（1）生化反應(yīng)鑒定
志賀菌屬的生化反應(yīng)具有典型特征，可與其他腸道桿菌區(qū)分，常用雙糖鐵培養(yǎng)基和生化反應(yīng)管檢測(cè)：
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（2）血清學(xué)鑒定
群血清凝集試驗(yàn)：先用四種群特異性抗血清（抗 A、抗 B、抗 C、抗 D）與純菌株進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，確定菌株所屬群。
若與抗 A 血清凝集，為痢疾志賀菌（A 群）；
與抗 B 血清凝集，為福氏志賀菌（B 群）（我國(guó)最常見(jiàn)的血清群）；
與抗 C 血清凝集，為鮑氏志賀菌（C 群）；
與抗 D 血清凝集，為宋內(nèi)志賀菌（D 群）。
型血清凝集試驗(yàn)：確定群后，再用該群的分型血清（如福氏志賀菌分為 1-6 型）進(jìn)一步鑒定至具體血清型，用于流行病學(xué)調(diào)查和溯源。
五、毒力檢測(cè)
志賀菌的致病性主要依賴(lài)其毒力因子（如侵襲力、內(nèi)毒素、外毒素），毒力檢測(cè)可輔助判斷菌株的致病能力。
侵襲力檢測(cè)：常用HeLa 細(xì)胞或 Vero 細(xì)胞侵襲試驗(yàn)，觀察細(xì)菌是否能侵入細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。志賀菌具有侵襲腸黏膜上皮細(xì)胞的能力，試驗(yàn)陽(yáng)性提示菌株有致病性。
毒素檢測(cè)：
內(nèi)毒素：可通過(guò)鱟試驗(yàn)檢測(cè)，但所有革蘭陰性菌均有內(nèi)毒素，特異性較低；
外毒素（志賀毒素）：僅痢疾志賀菌 1 型和部分 2 型產(chǎn)生，可通過(guò) ELISA 檢測(cè)，陽(yáng)性提示菌株毒力更強(qiáng)，易引起嚴(yán)重癥狀。
六、分子生物學(xué)檢測(cè)
現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室常用分子生物學(xué)方法，快速、敏感地檢測(cè)志賀菌，尤其適合抗生素治療后細(xì)菌培養(yǎng)陰性的情況。
聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：檢測(cè)志賀菌屬特有的基因（如侵襲質(zhì)?？乖?ipaH），特異性和敏感性均高于傳統(tǒng)培養(yǎng)法，可在數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果，還能區(qū)分不同血清群。
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）：不僅能定性檢測(cè)，還能定量分析標(biāo)本中志賀菌的數(shù)量，用于評(píng)估感染嚴(yán)重程度和治療效果。
基因測(cè)序：通過(guò)全基因組測(cè)序，分析菌株的基因結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系和耐藥基因，為流行病學(xué)調(diào)查和精準(zhǔn)用藥提供依據(jù)。
七、耐藥性檢測(cè)
志賀菌對(duì)常用抗生素（如磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)）的耐藥率逐年上升，耐藥性檢測(cè)至關(guān)重要。
紙片擴(kuò)散法（K-B 法）：將含有不同抗生素的紙片貼在接種了志賀菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后測(cè)量抑菌圈直徑，判斷菌株對(duì)該抗生素的敏感性。
肉湯稀釋法：測(cè)定最低抑菌濃度（MIC），更精準(zhǔn)地判斷耐藥程度，是耐藥性檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。
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