流感嗜血桿菌的培養(yǎng)和鑒定需要注意的相關事項有哪些？
小楊 / 2025-09-09 09:30:47
流感嗜血桿菌的培養(yǎng)和鑒定過程中，由于其對營養(yǎng)要求特殊、形態(tài)及生化特性有一定特異性，需注意以下關鍵事項，以確保結果的準確性和可靠性：
一、培養(yǎng)相關注意事項
1、營養(yǎng)條件的嚴格控制
流感嗜血桿菌生長依賴 X 因子（血紅素及其衍生物） 和 V 因子（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD），因此必須使用含這兩種因子的培養(yǎng)基，巧克力瓊脂平板是首選（通過加熱破壞紅細胞釋放 X 因子，并使 V 因子更易利用）。
避免使用普通血平板（未經加熱的血平板中，紅細胞的 V 因子可能被破壞，且 X 因子釋放不足，導致細菌生長不良）。
若進行液體培養(yǎng)，可在肉湯中添加裂解紅細胞或補充 X、V 因子（如加入亞硫酸鈉處理的血或商業(yè)因子添加劑）。
2、培養(yǎng)環(huán)境的優(yōu)化
需氧或兼性厭氧，培養(yǎng)時需保持一定濕度（可在孵箱內放置水盤），避免培養(yǎng)基干燥影響生長。
最適溫度為 35~37℃，pH 7.6~7.8，溫度過高（>38.5℃）或過低（<35℃）會抑制生長。
部分菌株可能需要 5%~10% CO?環(huán)境（尤其初代培養(yǎng)），可促進其生長（如腦膜炎患者的腦脊液標本）。
3、標本處理與接種時機
標本采集后需 立即送檢，尤其是腦脊液、血液等易污染或細菌易死亡的標本，避免長時間放置導致細菌活力下降（
流感嗜血桿菌對干燥、低溫敏感）。
血液標本需先接種于血培養(yǎng)瓶（含 X、V 因子或促生長因子），經增菌培養(yǎng)后再轉種至巧克力瓊脂；腦脊液標本離心后取沉淀物接種，提高檢出率。
接種量需適當，避免標本中雜菌過度生長抑制
流感嗜血桿菌（如呼吸道標本中可能含大量其他細菌，需選擇性培養(yǎng)時可加入萬古霉素等抑制革蘭氏陽性菌）。
4、培養(yǎng)時間的把控
初代培養(yǎng)需觀察 24~48 小時，部分緩慢生長菌株可能需要延長至 72 小時，避免因培養(yǎng)時間不足而漏檢（早期菌落可能極小，易被忽略）。
二、鑒定相關注意事項
1、形態(tài)學觀察的準確性
革蘭氏染色時需注意：
流感嗜血桿菌為革蘭氏陰性短小桿菌，但在陳舊培養(yǎng)物或膿性標本中可能呈多形性（球桿狀、長絲狀），易與其他革蘭氏陰性桿菌混淆，需結合培養(yǎng)特性綜合判斷。
莢膜染色僅對有莢膜菌株有效，無莢膜菌株（如非分型株）可能不顯色，不可僅憑莢膜有無排除診斷。
2、衛(wèi)星現(xiàn)象試驗的規(guī)范操作
衛(wèi)星現(xiàn)象是流感嗜血桿菌的特征性試驗，但需注意：
需使用
金黃色葡萄球菌 作為 V 因子提供者（其產生的 V 因子可擴散至培養(yǎng)基中），其他細菌可能不產生足夠 V 因子，導致試驗假陰性。
接種時需將待檢菌與金黃色葡萄球菌劃線距離適當（約 5~10mm），過近可能因葡萄球菌過度生長抑制待檢菌，過遠則 V 因子擴散不足，影響結果。
需在血平板上進行（巧克力平板中已含 V 因子，可能干擾試驗）。
3、生化反應的選擇與判斷
基礎生化反應包括：發(fā)酵葡萄糖（產酸不產氣）、不發(fā)酵乳糖、氧化酶陽性、觸酶陽性（部分菌株），這些是與其他革蘭氏陰性桿菌（如副流感嗜血桿菌、
卡他莫拉菌）鑒別的關鍵。
注意：少數(shù)菌株可能生化反應不典型（如遲緩發(fā)酵葡萄糖），需結合其他試驗（如衛(wèi)星現(xiàn)象、因子需求試驗）確認。
4、血清型鑒定的局限性
僅對有莢膜菌株（a~f 型）有效，非分型株（無莢膜）無法通過血清型鑒定，需結合分子生物學方法（如 PCR 檢測莢膜基因）區(qū)分。
乳膠凝集試驗檢測 Hib 莢膜抗原時，需注意標本中可能存在的交叉反應物質（如其他細菌的多糖抗原），必要時用陰性對照驗證。
5、耐藥菌株的影響
若標本來自已使用抗生素的患者，細菌可能因受抑制而生長不良，導致培養(yǎng)或鑒定困難，需結合抗原檢測或分子生物學方法（如 PCR）輔助診斷。
鑒定時需同時進行藥敏試驗，尤其注意產 β- 內酰胺酶菌株（對氨芐西林耐藥），避免因表型改變影響鑒定結果。
三、其他通用注意事項
污染控制：操作需在無菌環(huán)境中進行，避免雜菌污染（尤其是
葡萄球菌、
奈瑟菌等，可能與流感嗜血桿菌形態(tài)或培養(yǎng)特性相似）。
通過嚴格把控上述環(huán)節(jié)，可提高
流感嗜血桿菌培養(yǎng)和鑒定的準確性，為臨床診斷和治療提供可靠依據。
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