馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂培養(yǎng)基的滅菌方法及操作步驟！
小楊 / 2025-07-25 08:51:18
一、核心滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法
（一）原理
利用高壓蒸汽產(chǎn)生的高溫（121℃左右）殺滅培養(yǎng)基中可能存在的細(xì)菌、真菌、芽孢等所有微生物，同時(shí)不破壞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分（如葡萄糖、馬鈴薯浸出物中的有效成分）。
（二）具體操作步驟
1、分裝后密封
將制備好的培養(yǎng)基（已溶解、調(diào) pH、分裝至試管或錐形瓶）裝入容器，試管需加棉塞（或硅膠塞）并包扎，錐形瓶需加蓋或用紗布包裹瓶口，確保既透氣（滅菌時(shí)排出冷空氣）又能防止滅菌后污染。
2、放入高壓蒸汽滅菌鍋
將容器垂直放入滅菌鍋的滅菌籃中，避免傾倒；
注意不要裝得太滿，留出蒸汽流通空間，保證滅菌均勻。
3、設(shè)定滅菌參數(shù)
溫度：121℃
壓力：0.103-0.138MPa（對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的飽和蒸汽壓力）
時(shí)間：15-20 分鐘（時(shí)間過(guò)短可能滅菌不徹底，過(guò)長(zhǎng)可能破壞營(yíng)養(yǎng)成分）。
4、排氣與滅菌
先打開排氣閥，加熱至產(chǎn)生大量蒸汽，排出鍋內(nèi)冷空氣（冷空氣會(huì)導(dǎo)致溫度不達(dá)設(shè)定值，影響滅菌效果），待排氣閥持續(xù)排出白色蒸汽（約 3-5 分鐘）后，關(guān)閉排氣閥；
當(dāng)壓力和溫度升至設(shè)定值時(shí)，開始計(jì)時(shí)，保持參數(shù)穩(wěn)定至滅菌結(jié)束。
5、降壓與取出
滅菌結(jié)束后，關(guān)閉熱源，自然降壓至 0MPa（切勿強(qiáng)行打開排氣閥，避免培養(yǎng)基暴沸溢出）；
打開滅菌鍋蓋，取出培養(yǎng)基，待其冷卻（如需凝固成半固體狀態(tài)，可將試管傾斜放置，形成 “斜面” 或水平凝固）。
二、滅菌注意事項(xiàng)
1、徹底排氣
滅菌鍋冷空氣未排凈會(huì)導(dǎo)致 “假壓”（壓力達(dá)標(biāo)但溫度不足），可能造成滅菌不徹底，需確保排氣充分。
2、避免過(guò)度滅菌
葡萄糖在高溫下易分解產(chǎn)生有害物質(zhì)（如 5 - 羥甲基糠醛），且馬鈴薯浸出物中的維生素也可能被破壞，因此嚴(yán)格控制滅菌時(shí)間（不超過(guò) 20 分鐘）。
3、分裝量適中
容器內(nèi)培養(yǎng)基不宜超過(guò)容積的 2/3，防止滅菌時(shí)因蒸汽膨脹溢出。
4、滅菌后檢查
觀察培養(yǎng)基是否澄清（半固體狀態(tài)下允許少量馬鈴薯成分的沉淀，搖勻后不影響使用）；
若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基渾濁、有絮狀物或異味，可能滅菌失敗或已污染，需重新制備。
5、滅菌鍋維護(hù)
定期檢查滅菌鍋的壓力閥、密封圈等部件，確保設(shè)備正常運(yùn)行，避免安全隱患。
三、為何不采用其他滅菌方法？
干熱滅菌：溫度需 160-170℃、2-3 小時(shí)，會(huì)嚴(yán)重破壞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分，不適用。
煮沸滅菌：溫度僅 100℃，無(wú)法殺滅芽孢，滅菌不徹底。
過(guò)濾滅菌：適用于不耐高溫的液體，但瓊脂需加熱溶解，且培養(yǎng)基為半固體狀態(tài)，無(wú)法過(guò)濾。
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