精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基的核心原理和使用方法及適用范圍！
小楊 / 2025-07-19 09:42:56
精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基是專門用于支原體（尤其是依賴精氨酸代謝的支原體）分離、培養(yǎng)和增殖的液體培養(yǎng)基。支原體是一類無細(xì)胞壁、結(jié)構(gòu)簡單的原核微生物，營養(yǎng)需求苛刻，需在富含血清、氨基酸等成分的培養(yǎng)基中生長，而精氨酸支原體的生長尤其依賴精氨酸作為能量和代謝底物。
一、培養(yǎng)基的核心原理
支原體無法合成自身所需的全部營養(yǎng)物質(zhì)，其生長依賴外界提供的氨基酸、維生素、脂質(zhì)（如血清中的成分）等。精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)基于以下核心原理：
1、營養(yǎng)供給
基礎(chǔ)成分（如牛肉浸粉、蛋白胨）提供氮源、維生素和礦物質(zhì)，滿足支原體基礎(chǔ)代謝需求。
血清（通常為馬血清或小牛血清）提供脂質(zhì)、膽固醇和生長因子，支原體的細(xì)胞膜合成依賴這些成分（因支原體無細(xì)胞壁，細(xì)胞膜是其結(jié)構(gòu)核心）。
2、精氨酸的關(guān)鍵作用
精氨酸是精氨酸支原體的核心能量來源：這類支原體可通過精氨酸脫氫酶分解精氨酸，產(chǎn)生 ATP（能量）和氨（NH?），支撐其生長繁殖。
培養(yǎng)基中添加精氨酸可特異性促進(jìn)該類支原體增殖，同時(shí)抑制不依賴精氨酸的微生物（一定程度上提高選擇性）。
3、pH 緩沖與指示
培養(yǎng)基通常含酚紅作為 pH 指示劑：精氨酸分解產(chǎn)生氨會使培養(yǎng)基 pH 升高，酚紅由紅色變?yōu)榉奂t色或紫紅色，可通過顏色變化判斷支原體是否生長（無需顯微鏡觀察，直觀便捷）。
二、培養(yǎng)基的主要成分（典型配方）
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注：部分配方可能添加青霉素（抑制細(xì)菌，因支原體對青霉素不敏感），進(jìn)一步提高選擇性。
三、使用方法（完整流程）
1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備（若為干粉，需先配制）
溶解與滅菌：按配方稱取干粉，加入去離子水?dāng)嚢枞芙猓环盅b至試管（每管 5-10mL），121℃高壓滅菌 15 分鐘（血清需滅菌后無菌添加，避免高溫破壞成分）。
添加血清和抗生素：滅菌后冷卻至 50℃左右，無菌操作加入過濾除菌的血清（終濃度 10-20%）和青霉素（若需，終濃度 100-200U/mL），混勻。
調(diào) pH：滅菌后若 pH 偏離 7.2-7.4（支原體最適 pH），可無菌滴加無菌鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。
2、樣本接種
樣本類型：適用于臨床樣本（如呼吸道分泌物、尿道分泌物、組織勻漿）或支原體純培養(yǎng)物的傳代。
接種量：取 0.1-0.5mL 樣本（或菌液），無菌操作加入培養(yǎng)基試管中，輕輕混勻。
陰性對照：同時(shí)設(shè)置未接種的空白培養(yǎng)基試管，排除污染或自身 pH 變化干擾。
3、培養(yǎng)與觀察
培養(yǎng)條件：35-37℃恒溫培養(yǎng)（需有氧環(huán)境，無需 CO?培養(yǎng)箱），培養(yǎng)時(shí)間通常為 2-7 天（支原體生長較慢，需耐心觀察）。
生長判斷：
若支原體生長，精氨酸分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基 pH 升高，酚紅由紅色變?yōu)榉奂t色或紫紅色（顏色變化越明顯，生長越旺盛）。
若 7 天后仍無顏色變化，且無渾濁（支原體生長一般不導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁，因數(shù)量較少），可判斷為陰性。
4、后續(xù)操作（若陽性）
傳代與純化：取陽性培養(yǎng)物 0.1-0.2mL，接種至新鮮精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基（形成菌落），進(jìn)一步純化。
鑒定：結(jié)合固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)（“煎蛋狀” 菌落）、生化試驗(yàn)或 PCR 檢測，確認(rèn)是否為目標(biāo)支原體。
四、注意事項(xiàng)
無菌操作：支原體對污染敏感（細(xì)菌、真菌易快速繁殖抑制支原體），所有步驟需在超凈工作臺中進(jìn)行，避免污染。
血清質(zhì)量：血清需無支原體污染（選擇正規(guī)廠商），否則會導(dǎo)致假陽性。
顏色變化的特異性：若培養(yǎng)基渾濁且變色，可能是細(xì)菌污染（需結(jié)合固體培養(yǎng)基菌落形態(tài)排除）；純支原體生長通常不渾濁，僅顏色變化。
保存條件：配制好的培養(yǎng)基 4℃冷藏保存，1 周內(nèi)使用；避免反復(fù)凍融，否則血清成分易破壞。
五、適用范圍
主要用于精氨酸依賴型支原體（如肺炎支原體、人型支原體等部分菌株）的分離培養(yǎng)和生長檢測，廣泛應(yīng)用于臨床微生物檢驗(yàn)（如呼吸道感染、泌尿生殖道感染的病原學(xué)診斷）和實(shí)驗(yàn)室支原體研究。
通過以上原理和方法，可高效利用精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基完成支原體的培養(yǎng)與初步鑒定，其核心優(yōu)勢在于通過精氨酸選擇性和 pH 指示，實(shí)現(xiàn)直觀、特異性的生長檢測。
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