確定普通瓊脂培養(yǎng)基滅菌時(shí)間的具體依據(jù)和操作標(biāo)準(zhǔn)！
小楊 / 2025-07-18 09:46:04
確定
普通瓊脂培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間，需結(jié)合滅菌方法（主要為高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基特性及微生物污染風(fēng)險(xiǎn)綜合判斷，核心目標(biāo)是徹底殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有微生物，同時(shí)避免過(guò)度滅菌破壞培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分。以下是具體依據(jù)和操作標(biāo)準(zhǔn)：
一、滅菌時(shí)間的核心依據(jù)
1、滅菌方法的選擇
普通瓊脂培養(yǎng)基的滅菌幾乎均采用高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌），其原理是利用高溫飽和蒸汽穿透培養(yǎng)基，通過(guò)蛋白質(zhì)變性殺滅微生物。相比干熱滅菌，濕熱滅菌效率更高，所需時(shí)間更短，能更好保護(hù)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分。
2、關(guān)鍵滅菌參數(shù)
高壓蒸汽滅菌的核心參數(shù)為溫度、壓力和時(shí)間，三者需匹配以達(dá)到滅菌效果：
標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)：121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²），此條件下微生物（包括耐熱芽孢）的殺滅效率最高。
時(shí)間計(jì)算起點(diǎn)：從滅菌鍋內(nèi)達(dá)到設(shè)定溫度和壓力后開(kāi)始計(jì)時(shí)，而非從加熱開(kāi)始。
二、普通瓊脂培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間
在 121℃、103.4kPa 的標(biāo)準(zhǔn)條件下，普通瓊脂培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間通常為20 分鐘，原因如下：
1、殺滅耐熱芽孢的需求
最耐熱的微生物芽孢（如
枯草芽孢桿菌芽孢）在 121℃下的滅菌 “D 值”（殺滅 90% 芽孢所需時(shí)間）約為 1.5~3 分鐘，20 分鐘的滅菌時(shí)間可確保即使存在少量芽孢也能被徹底殺滅（安全系數(shù)足夠）。
2、培養(yǎng)基體積與分裝的影響
若培養(yǎng)基分裝量較少（如錐形瓶?jī)?nèi)體積≤500mL），20 分鐘足以讓蒸汽穿透并達(dá)到滅菌效果。
若分裝量較大（如 1000mL 以上）或容器較深，可適當(dāng)延長(zhǎng)至 25~30 分鐘，確保內(nèi)部溫度達(dá)到滅菌條件。
3、避免營(yíng)養(yǎng)成分破壞
過(guò)度滅菌（如超過(guò) 30 分鐘）會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基中的糖類(lèi)、氨基酸等成分分解（如牛肉膏中的碳水化合物焦化），影響微生物生長(zhǎng)，因此 20 分鐘是平衡滅菌效果與營(yíng)養(yǎng)保留的最優(yōu)時(shí)間。
三、特殊情況的調(diào)整
1、含易破壞成分的培養(yǎng)基
若在普通瓊脂基礎(chǔ)上添加了熱敏感成分（如維生素、血清等，普通瓊脂本身不含此類(lèi)成分），需采用 “分段滅菌” 或 “過(guò)濾滅菌”，但普通瓊脂培養(yǎng)基無(wú)需此操作。
2、滅菌設(shè)備的校準(zhǔn)
若滅菌鍋存在壓力或溫度偏差（如實(shí)際溫度低于 121℃），需適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間（需通過(guò)設(shè)備校準(zhǔn)確認(rèn)）。建議定期校驗(yàn)滅菌鍋的溫度傳感器和壓力表，確保參數(shù)準(zhǔn)確。
四、滅菌效果的驗(yàn)證
滅菌后需通過(guò)以下方式驗(yàn)證是否合格：
無(wú)菌試驗(yàn)：將未接種的培養(yǎng)基在 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24~48 小時(shí)，若無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明滅菌合格。
陽(yáng)性對(duì)照：接種已知菌（如
大腸桿菌），若能正常生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分未被過(guò)度破壞。
五、總結(jié)
普通瓊脂培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間以121℃、103.4kPa 下 20 分鐘為標(biāo)準(zhǔn)，適用于大多數(shù)常規(guī)分裝量（≤500mL）。若分裝量過(guò)大或設(shè)備存在偏差，可適當(dāng)延長(zhǎng)至 25~30 分鐘，但需以滅菌效果驗(yàn)證為依據(jù)，避免過(guò)度滅菌影響培養(yǎng)基質(zhì)量。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買(mǎi)等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類(lèi)網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
下載附件
上一篇：微生物檢測(cè)培養(yǎng)基質(zhì)量控制的核心目標(biāo)與關(guān)鍵環(huán)節(jié)及應(yīng)用！
下一篇：實(shí)驗(yàn)操作后對(duì)生物安全柜進(jìn)行清潔和消毒的具體步驟與要點(diǎn)！