沙堡弱液體培養(yǎng)基的檢驗(yàn)原理和使用方法及主要應(yīng)用！
小楊 / 2025-07-10 09:14:57
沙堡弱液體培養(yǎng)基（Sabouraud Liquid Medium）是專(zhuān)門(mén)用于分離和培養(yǎng)真菌（霉菌和酵母菌） 的一種經(jīng)典液體培養(yǎng)基。其名稱(chēng)“弱”指的是其偏酸性的pH值，這是其抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的關(guān)鍵。以下是其檢驗(yàn)原理和使用方法：
一、檢驗(yàn)原理
1、選擇性原理：
低pH值 (約 pH 5.6)：這是沙堡弱培養(yǎng)基的核心選擇性原理。大多數(shù)細(xì)菌在偏酸性的環(huán)境中生長(zhǎng)受到顯著抑制甚至無(wú)法生長(zhǎng)，而大多數(shù)致病性真菌和腐生真菌在此pH范圍內(nèi)能夠良好生長(zhǎng)。
添加抗生素：通常在滅菌后的培養(yǎng)基中加入廣譜抗生素。氯霉素主要抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)，慶大霉素對(duì)革蘭氏陰性菌效果更強(qiáng)。這進(jìn)一步提高了培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌的抑制作用，同時(shí)不影響真菌的生長(zhǎng)。
2、營(yíng)養(yǎng)原理：
高糖濃度：培養(yǎng)基含有較高濃度的葡萄糖（通常4%）。這為真菌（尤其是酵母菌和需要豐富碳源的霉菌）提供了充足的能量來(lái)源，促進(jìn)其快速生長(zhǎng)和繁殖。
蛋白胨：提供真菌生長(zhǎng)所需的氮源、維生素、氨基酸和礦物質(zhì)等基本營(yíng)養(yǎng)成分。
水：作為溶劑和反應(yīng)介質(zhì)。
3、總結(jié)原理：
沙堡弱液體培養(yǎng)基通過(guò)低pH環(huán)境和添加抗生素選擇性抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，同時(shí)提供豐富的碳源（葡萄糖）和氮源（蛋白胨） 以支持真菌的旺盛生長(zhǎng)。液體狀態(tài)使得它特別適合用于需要振蕩培養(yǎng)、大規(guī)模培養(yǎng)、觀察渾濁度變化或從液體樣本中富集真菌的情況。
二、使用方法
1、培養(yǎng)基配制與滅菌：
按照商品化脫水培養(yǎng)基包裝上的說(shuō)明稱(chēng)取所需量，或根據(jù)配方（通常為：葡萄糖40g，蛋白胨10g，蒸餾水1000ml）準(zhǔn)確稱(chēng)量各組分。
將稱(chēng)量好的成分溶解于適量蒸餾水或去離子水中。
加熱并不斷攪拌使其完全溶解。
調(diào)節(jié)pH值至約5.6（通常配方設(shè)計(jì)溶解后即接近此pH，但需用pH計(jì)校準(zhǔn)，可用稀鹽酸或氫氧化鈉微調(diào)）。
分裝到合適的容器中（如試管、三角瓶）。
高壓蒸汽滅菌：121°C, 15分鐘。注意：抗生素不耐熱！
2、添加抗生素 (無(wú)菌操作)：
待滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至約45-50°C（手摸容器溫?zé)岬粻C手）。
在無(wú)菌環(huán)境（如超凈工作臺(tái)）中，按說(shuō)明加入過(guò)濾除菌的抗生素溶液（常用氯霉素終濃度0.05-0.1mg/ml 或慶大霉素終濃度約5-50μg/ml）。輕輕搖勻。這是關(guān)鍵步驟，避免污染。
3、接種樣本：
樣本類(lèi)型：無(wú)菌體液（血液、腦脊液、胸腹水、關(guān)節(jié)液）、經(jīng)處理的組織勻漿液、環(huán)境水樣、或從固體培養(yǎng)基上挑取的真菌菌落懸浮液等。
嚴(yán)格無(wú)菌操作！
將適量樣本（如血液培養(yǎng)通常5-10ml）無(wú)菌注入裝有適量培養(yǎng)基（通常血液培養(yǎng)瓶含50-100ml培養(yǎng)基）的培養(yǎng)瓶中。
對(duì)于其他液體樣本或菌落懸液，直接無(wú)菌加入適量體積到裝有培養(yǎng)基的試管或三角瓶中。
4、培養(yǎng)：
溫度：大多數(shù)臨床致病真菌在25-30°C培養(yǎng)。對(duì)于懷疑雙相真菌或某些酵母菌（如
白念珠菌在37°C生長(zhǎng)更好），需要同時(shí)或后續(xù)在37°C培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度需根據(jù)目標(biāo)真菌設(shè)定。
條件：
靜止培養(yǎng)：可放置于培養(yǎng)箱中靜置。適合觀察表面生長(zhǎng)（如某些霉菌形成菌膜）或酵母菌的均勻渾濁。
振蕩培養(yǎng)：更常用。將培養(yǎng)瓶/管置于搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)（如100-150 rpm）。這能增加溶氧，促進(jìn)需氧真菌（特別是霉菌）的生長(zhǎng)，使生長(zhǎng)更均勻快速，便于觀察渾濁度變化。
時(shí)間：真菌生長(zhǎng)通常比細(xì)菌慢。至少培養(yǎng)1-2周，對(duì)于某些生長(zhǎng)緩慢的深部真菌或從無(wú)菌部位采集的樣本，建議培養(yǎng)4周或更久。需定期觀察。
5、觀察與結(jié)果判讀：
肉眼觀察：
渾濁度：酵母菌生長(zhǎng)通常導(dǎo)致培養(yǎng)基均勻渾濁（類(lèi)似細(xì)菌生長(zhǎng)，但速度較慢）。霉菌生長(zhǎng)可能表現(xiàn)為不均勻的絮狀、顆粒狀渾濁，或形成菌球、菌膜。
沉淀：菌體可能沉于管/瓶底形成沉淀。
表面生長(zhǎng)：靜止培養(yǎng)時(shí)，霉菌可能在液面形成菌膜。
顯微鏡檢查：
一旦發(fā)現(xiàn)渾濁或疑似生長(zhǎng)，取少量培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色、墨汁染色（懷疑隱球菌）或乳酸酚棉藍(lán)染色，直接在顯微鏡下觀察真菌形態(tài)（酵母細(xì)胞、假菌絲、菌絲、孢子等），進(jìn)行初步鑒定。
轉(zhuǎn)種固體培養(yǎng)基：
一旦發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)或到達(dá)培養(yǎng)終點(diǎn)（即使無(wú)肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)），應(yīng)將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種到固體沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基或其他合適的真菌分離培養(yǎng)基（如
馬鈴薯葡萄糖瓊脂）上，以便分離純化菌落，進(jìn)行更準(zhǔn)確的形態(tài)學(xué)鑒定和后續(xù)的生化或分子生物學(xué)鑒定。
對(duì)于血液培養(yǎng)瓶，現(xiàn)代自動(dòng)化系統(tǒng)通常會(huì)報(bào)警提示生長(zhǎng)。
6、質(zhì)量控制：
三、主要應(yīng)用
從無(wú)菌體液（尤其是血液）中分離和富集真菌病原體（如念珠菌、隱球菌、馬爾尼菲籃狀菌）。
從其他液體樣本（如腦脊液、關(guān)節(jié)液、胸腹水、尿液離心沉淀物懸浮液）中培養(yǎng)真菌。
大規(guī)模培養(yǎng)真菌以獲取菌體或代謝產(chǎn)物。
研究真菌在液體環(huán)境中的生長(zhǎng)特性。
作為自動(dòng)化血液培養(yǎng)系統(tǒng)檢測(cè)真菌血癥的基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分。
四、注意事項(xiàng)
嚴(yán)格無(wú)菌操作：避免操作過(guò)程中引入污染。
抗生素添加時(shí)機(jī)：務(wù)必在培養(yǎng)基滅菌冷卻后，于無(wú)菌條件下加入抗生素。
培養(yǎng)時(shí)間足夠長(zhǎng)：切勿過(guò)早丟棄陰性培養(yǎng)物。
雙溫度培養(yǎng)：對(duì)疑似雙相真菌或某些病原體，需設(shè)置不同溫度培養(yǎng)。
及時(shí)轉(zhuǎn)種：一旦液體中有生長(zhǎng)跡象，立即轉(zhuǎn)種固體培養(yǎng)基進(jìn)行分離純化。
生物安全：操作可能含有病原真菌的培養(yǎng)物時(shí)，應(yīng)在相應(yīng)生物安全級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，做好個(gè)人防護(hù)。
總而言之，
沙堡弱液體培養(yǎng)基是利用其低pH和添加抗生素的選擇性，以及高糖的營(yíng)養(yǎng)性，專(zhuān)門(mén)用于在液體環(huán)境中促進(jìn)真菌生長(zhǎng)同時(shí)抑制細(xì)菌的培養(yǎng)基。它在臨床真菌學(xué)診斷（尤其是真菌血癥）和真菌研究中具有重要價(jià)值。正確配制、無(wú)菌添加抗生素、設(shè)定合適的培養(yǎng)條件和時(shí)間、及時(shí)觀察和轉(zhuǎn)種是成功使用的關(guān)鍵。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買(mǎi)等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類(lèi)網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
下載附件
上一篇：微生物凍干粉菌種的復(fù)蘇與接種及培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程！
下一篇：麥芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基的成分與作用及制備與應(yīng)用領(lǐng)域！