微生物檢測(cè)中幾種最常用且重要的細(xì)菌接種方法！
小楊 / 2025-06-11 09:59:53
百歐博偉生物：在微生物檢測(cè)中，細(xì)菌接種是將待測(cè)樣本（或純培養(yǎng)物）轉(zhuǎn)移到適宜的培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基中的過程，目的是讓細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，以便進(jìn)行分離、純化、計(jì)數(shù)、鑒定或特性研究。以下是幾種最常用且重要的細(xì)菌接種方法：
一、平板劃線法
目的：分離混合樣本中的單個(gè)細(xì)菌，獲得單個(gè)、孤立的菌落，以便進(jìn)行純培養(yǎng)和鑒定。
方法：
用無菌接種環(huán)沾取少量樣本（菌液或待分離物）。
在固體平板培養(yǎng)基表面進(jìn)行劃線。有多種劃線方式：
分區(qū)劃線法：最常用。將平板分成4個(gè)區(qū)域。先在第一個(gè)區(qū)域密集劃幾道線（約占1/4面積），灼燒接種環(huán)冷卻后，從第一區(qū)末端劃出幾條線進(jìn)入第二區(qū)（約占1/4面積），再次灼燒冷卻，從第二區(qū)末端劃入第三區(qū)，最后劃入第四區(qū)。樣本中的細(xì)菌隨著劃線被逐漸稀釋，在第四區(qū)通常能長(zhǎng)出單個(gè)菌落。
連續(xù)劃線法：從平板一邊開始，連續(xù)地、緊密地呈“之”字形劃線覆蓋整個(gè)平板表面。適用于樣本中細(xì)菌數(shù)量較少或需要大量分離的情況。
放射劃線法：從平板中心開始，向四周放射狀劃線。也用于分離。
工具：主要使用接種環(huán)。
關(guān)鍵點(diǎn)：無菌操作，分區(qū)劃線時(shí)每劃完一個(gè)區(qū)必須灼燒接種環(huán)并冷卻，劃線力度適中避免劃破瓊脂。
二、傾注平板法
目的：主要用于菌落計(jì)數(shù)（如水質(zhì)、食品、藥品的細(xì)菌總數(shù)測(cè)定）。
方法：
取一定量（通常1mL）的稀釋樣本（或原液）加入無菌培養(yǎng)皿中。
將融化并冷卻至約45-50°C（不燙手）的瓊脂培養(yǎng)基傾注到培養(yǎng)皿中。
立即蓋上皿蓋，輕輕但充分地水平旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使樣本與培養(yǎng)基混合均勻。
待瓊脂完全凝固后，倒置培養(yǎng)。
結(jié)果：細(xì)菌在培養(yǎng)基內(nèi)部和表面生長(zhǎng)，形成菌落。通過計(jì)數(shù)菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣本中的活菌總數(shù)。
優(yōu)勢(shì)：能計(jì)數(shù)厭氧菌和兼性厭氧菌。適合含菌量較高的樣本。
缺點(diǎn)：菌落可能重疊或在深層生長(zhǎng)不易觀察；需要融化并冷卻培養(yǎng)基，操作步驟稍多。
三、涂布平板法
目的：也主要用于菌落計(jì)數(shù)，特別適用于嚴(yán)格好氧菌的計(jì)數(shù)或需要表面菌落形態(tài)觀察的情況。
方法：
先將滅菌的固體瓊脂培養(yǎng)基傾注入培養(yǎng)皿中，待其完全凝固并干燥表面水分。
取一定量（通常0.1mL或0.2mL）的稀釋樣本滴加在平板中央。
用無菌的涂布棒（L形玻璃棒或一次性塑料涂布棒）在瓊脂表面均勻地涂布開。涂布棒需先用酒精浸泡并灼燒滅菌，冷卻后使用。
待接種液被瓊脂吸收后（可將平板正置放置片刻），倒置培養(yǎng)。
結(jié)果：細(xì)菌僅在培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，形成菌落。
優(yōu)勢(shì)：菌落都在表面，形態(tài)清晰易觀察計(jì)數(shù)。適合好氧菌計(jì)數(shù)。
缺點(diǎn)：對(duì)操作技術(shù)要求稍高（涂布均勻），加入的樣本量較?。ㄍǔ?le;0.2mL），可能導(dǎo)致誤差；深層厭氧菌不易生長(zhǎng)。
四、液體接種法
目的：增菌培養(yǎng)（使少量細(xì)菌快速大量繁殖）、進(jìn)行生化試驗(yàn)（接種于各種液體生化管）、保存菌種（如肉湯管）、制備菌懸液等。
方法：
用無菌接種環(huán)或無菌吸管/移液器吸取樣本或純培養(yǎng)物。
將樣本轉(zhuǎn)移至裝有液體培養(yǎng)基（如肉湯、蛋白胨水、各種糖發(fā)酵管等）的試管或燒瓶中。
在接近液面處的管壁輕輕研磨接種環(huán)，或直接將吸管中的液體吹打入培養(yǎng)基中。
蓋好蓋子或塞好棉塞/硅膠塞，輕輕振蕩混勻。
關(guān)鍵點(diǎn)：無菌操作，避免接種環(huán)接觸管口；混勻很重要。
五、穿刺接種法
目的：
觀察細(xì)菌的動(dòng)力（運(yùn)動(dòng)性）：能運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌會(huì)從穿刺線向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，呈云霧狀或羽毛狀；不運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌只沿穿刺線生長(zhǎng)。
保藏菌種（特別是半固體培養(yǎng)基）。
進(jìn)行某些生化試驗(yàn)。
方法：
使用接種針（直針），沾取少量菌落或菌苔。
垂直刺入裝有半固體瓊脂培養(yǎng)基（或特定生化試驗(yàn)培養(yǎng)基）的試管中心，刺入深度約為試管高度的2/3到3/4。
沿原穿刺路徑小心退出接種針。
關(guān)鍵點(diǎn)：穿刺線要直且位于培養(yǎng)基中央，退出時(shí)避免晃動(dòng)導(dǎo)致穿刺線不規(guī)則。
六、斜面接種法
目的：擴(kuò)大培養(yǎng)以獲得大量菌體（用于生化試驗(yàn)、抗原制備等）、短期保藏菌種、觀察菌苔特征。
方法：
用無菌接種環(huán)沾取菌落或菌液。
在瓊脂斜面培養(yǎng)基表面，從底部開始向上劃一條連續(xù)的“之”字形直線（蛇形劃線）。
或先在斜面底部劃一條直線，再在其上作蜿蜒劃線。
結(jié)果：細(xì)菌在斜面上生長(zhǎng)形成一層菌苔。
七、點(diǎn)接種法
目的：快速接種多個(gè)點(diǎn)（如進(jìn)行多點(diǎn)藥敏試驗(yàn)初篩、快速觀察多個(gè)菌落在特定培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況）。
方法：用無菌接種針或細(xì)接種環(huán)沾取少量菌，垂直點(diǎn)在固體平板或斜面的特定位置上。
特點(diǎn)：操作快速，節(jié)省空間。
八、其他方法：
螺旋平板法：一種自動(dòng)化的定量接種方法，通過螺旋形的機(jī)械裝置將樣本連續(xù)稀釋地涂布在平板上，便于菌落計(jì)數(shù)器的自動(dòng)計(jì)數(shù)。
玻片培養(yǎng)法：用于觀察真菌或放線菌的微觀形態(tài)，較少用于常規(guī)細(xì)菌檢測(cè)。
濾膜法：先讓樣本通過濾膜（如0.45μm或0.22μm微孔濾膜）截留細(xì)菌，再將濾膜貼于固體培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)，適用于含菌量低的液體樣本（如水樣）。
九、選擇接種方法的依據(jù)：
檢測(cè)目的：分離純化（劃線）、計(jì)數(shù)（傾注/涂布）、增菌（液體）、動(dòng)力觀察（穿刺）、生化試驗(yàn)（液體/斜面/穿刺）、保種（斜面/半固體穿刺）。
樣本類型和含菌量：高濃度（需稀釋后傾注/涂布）、低濃度（需增菌或?yàn)V膜法）。
目標(biāo)細(xì)菌的特性：好氧（涂布）、厭氧（傾注/特殊培養(yǎng)）、運(yùn)動(dòng)性（穿刺）。
培養(yǎng)基類型：固體平板、斜面、半固體、液體。
熟練掌握這些接種方法并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，是保證微生物檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的基礎(chǔ)。每種方法都有其特定的應(yīng)用場(chǎng)景和優(yōu)缺點(diǎn)，需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康撵`活選擇。
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