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卡介菌(BCG)DNA國家參考品
    卡介菌(BCG)DNA國家參考品
  • 平臺編號:bio-134966
  • 拉丁屬名: National reference for BCG DNA
  • 規(guī)格:0.1 ml/支
  • 用途:多糖核酸成品鑒別參考
  • 服務(wù)費用:
    加載中……
  • 訂購
  • 注意事項:僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準)

卡介苗(BCG)DNA 國家參考品National reference for BCG DNA 
【性狀】凍干粉
【用途】本參考品從我國卡介苗生產(chǎn)用工作種子批上海株 D2-甲 12(2)培養(yǎng)的菌體中提取,經(jīng)多重聚合酶鏈反應(yīng)(mPCR)檢測卡介菌特異性缺失區(qū) RD1,鑒定為卡介菌 DNA,并經(jīng)國內(nèi)有關(guān)單位復(fù)核驗證。供卡介菌菌株、卡介菌核酸類制品鑒別實驗用定性參考品。
【包裝】安瓿瓶
【規(guī)格】3 μg/支
【使用方法和要求】
1、使用方法取本參考品 1 支,加入滅菌超純水 200 μL 復(fù)溶,靜置 2-3 min待用。
采用 ET1(5'-AAGCGGTTGCCGCCGACCGACC-3')、ET2(5'-CTGGCTATATTCCTGGGCCCGG-3')、ET3(5'-GAGGCGATCTGGCGGTTTGGGG-3')三條引物,分別以滅菌超純水稀釋至終濃度為 10 μM。取參考品溶液 5 μL,加至 45 μL 反應(yīng)試劑中【10 倍 PCR 緩沖液(pH8.3 100 mM Tris-HCl,500 mM KCl,15 mMMgCl2)5 μL、dNTP Mixture 2 μL、5 U/μL Taq 酶 0.3 μL、2 μL引物 ET1、4 μL 引物 ET2、2 μL 引物 ET3,滅菌超純水 29.7 μL】,共 50 μL 反應(yīng)體系。
反應(yīng)體系于 94℃預(yù)變性 10 min,然后 94℃變性 1 min、64℃退火 1 min、72℃延伸 30 s,循環(huán) 30 次后,72℃再延伸 7 min。取 PCR產(chǎn)物 10 μL 加 6 倍上樣緩沖液(配方:1、吸取 2 mL EDTA(500 mMpH 8.0)加入約 40 mL 雙蒸水;2、再稱量 250 mg 溴酚藍;3、量取50 mL 丙三醇;4、定容至 100 mL,4 度保存)2 μL 混勻,上樣于
3%的瓊脂糖凝膠泳道,分子量標記物(50 bp DNA ladder )直接上樣 6 μL。于 100 mA 電泳 50 min。根據(jù)凝膠成像結(jié)果,以 50 bp DNAladder 為分子量標記,觀察參考品 PCR 擴增片段分子量大小。
2、判定標準
參考品擴增片段為約 200 bp(測序為 193 bp)的核酸片段,供試品與參考品的擴增條帶長度一致。結(jié)果判斷模式圖如下:
S S 

注:S 為本參考品,M 為分子量標記
【儲藏條件】2-8℃。復(fù)溶后-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
【有效期】國家藥品標準物質(zhì)不設(shè)具體有效期,按照規(guī)定條件保存的標準物質(zhì),在中國食品藥品檢定研究院發(fā)布停用通知前有效。
聲明:
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