基本信息
啟動(dòng)子:CspA promoter
復(fù)制子:F1 ori,ori
質(zhì)粒分類:大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒
質(zhì)粒大小:4377bp
原核抗性:氨芐青霉素Amp（100μg/ml）
克隆菌株:DH5α等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:37℃，有氧，LB
表達(dá)宿主:BL21等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:37℃，有氧，LB
誘導(dǎo)方式:IPTG或乳糖及其類似物
5'測序引物:pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG）
3'測序引物:pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG）
質(zhì)粒簡介
pCold III質(zhì)粒是利用冷休克基因CspA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE）,His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
