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人肝癌細胞Hep G2 [HEPG2]是1975年從一名罹患肝癌的15歲白人男性青年的腫瘤組織中分離獲得。據(jù)報道，該細胞不攜帶乙肝病毒基因組，但表達一系列蛋白，包括甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、結(jié)合珠蛋白、銅藍蛋白、纖溶酶原、補體C4、C3激活物、纖維蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白等；表達胰島素受體和胰島素樣生長因子IGFⅡ的受體，表達3-羥基-3-甲基戊二酰還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA)和肝三酰甘油脂肪酶活性。另據(jù)資料顯示，該細胞在免疫抑制小鼠中不致瘤，在半固體培養(yǎng)基中可成瘤，可用于大規(guī)模培養(yǎng)體系，已廣泛應(yīng)用于細胞毒理學(xué)實驗和腫瘤生物學(xué)研究。

 

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶NTCP基因和嘌呤霉素抗性。

 

該細胞puro藥篩濃度為2.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用1.0ug/ml puro維持

 

細胞特性

 

1） 來源：肝細胞癌

 

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

 

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

 

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

5)  用途：僅供科研使用。

 

運輸和保存

 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

 

細胞接收后的處理

 

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

 

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

 

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

 

1） 準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

 

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

培養(yǎng)注意事項：

 

1. 該細胞puro藥篩濃度為2.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用1.0ug/ml puro維持

 

2.  hepg2細胞復(fù)蘇或傳代后會有少部分的細胞貼壁和部分懸浮的細胞，復(fù)蘇兩天后細胞會從貼壁細胞向外開始生長，有時細胞再生長過程中，細胞會再貼壁細胞的上方生長，形成不同的細胞層，這種情況會有發(fā)生。 在細胞復(fù)蘇的一周內(nèi)，培養(yǎng)瓶中 通常會有懸浮的活的細胞團，在換液過程中不要丟棄在這些活的懸浮細胞，可以通過離心（125×g）回收細胞，重新打回到培養(yǎng)瓶中，分離或者丟棄漂浮的活細胞會使細胞數(shù)量變少，引起細胞的停滯生長或細胞死亡。

 

3.  培養(yǎng)條件的細微變化，尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量，可能會影響細胞的生長狀況，在細胞的生長過程中會有細胞內(nèi)的液泡出現(xiàn)，特別在細胞快要融合是會出現(xiàn)這種情況。培養(yǎng)細胞時使用未被滅活的高質(zhì)量、低內(nèi)毒素的胎牛血清，可以使細胞更好的貼壁和形成單層細胞.

 

4. 細胞在生長過程中可以通過將血清濃度提到到20%來改善細胞生長緩慢的情況。（參考atcc 有關(guān)該細胞的描述）

 

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。